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长效棘白菌素类化合物BG40018抗真菌药效、药代动力学和一般

毒性研究

真菌感染是对人与动物危害最严重的人畜共患病之一,已知大约100种真菌

对人和动物是具有致病性的。机会性和侵袭性真菌感染已经成为免疫缺陷病人

(如HIV、癌症患者和器官移植病人)发病和死亡的主要原因[1-4]。

在过去几十年里,真菌发病率以惊人的速度增长。据报道,系统性真菌感染的

病死率超过30%[5-71。

目前临床常用的抗深部真菌药物是唑类和两性霉素B。原发性和机会性致病

真菌不断出现耐药以及药物对宿主的毒性问题使临床迫切需要开发新的抗真菌

药物[8-121。

棘白菌素类药物属于脂肽抗真菌药物,通过非竞争性抑制真菌细胞壁(1,3)-

β-D-葡聚糖合成酶,葡聚糖合成酶是保持真菌细胞壁完整性的必要成分[13]。由

于哺乳动物没有细胞壁,故该类药对人体的毒性较低,副作用较少。

与其它抗真菌药物相比,棘白菌素类药物不易产生耐药且没有药物-药物相

互作用[14],是目前一种重要的治疗严重深部真菌感染药物[15]。阿尼芬净属于

第三代棘白菌素类的半合成抗真菌药,对所有念珠菌,包括对唑类和多烯类耐药

的念珠菌属,具有较强的杀菌作用,同时对曲霉菌也有一定的抑制作用[16,17]。

然而阿尼芬净溶解性较差,临床使用需要毒性较大的增溶剂(如:吐温80等),

临床每天给药成本较高,这在一定程度上限制了其临床应用[18]。改善水溶性并

延长其半衰期的各种策略广泛应用于阿尼芬净的结构改造。

BG40018是对阿尼芬净结构修饰而得到的发酵半合成棘白菌素类药物,通过

抑制真菌细胞壁(1,3)-β-D-葡聚糖合成酶而发挥抗真菌作用。本课题对

BG40018的体外活性、体内活性、药代动力学特征和安全性进行研究,为BG40018

的使用和进一步开发提供理论依据。

1.BG40018体外抗真菌活性研究为研究BG40018对酵母菌和霉菌的体外抗真

菌活性。按照临床和实验室标准品研究所(ClinicalandLaboratoryStandards

Institute)M38-A2和M27-A3文件所述程序对BG40018体外抗念珠菌属的最低

抑菌浓度(MIC)进行了测定,同时以阿尼芬净为对照药物。

药物经倍比稀释至指定浓度范围,RPMI1640培养液加入吗啉基丙磺酸(MOPS)

并调节pH至7.0,起始接种浓度为0.5×103～2.5×103CFU/mL。念珠菌微量滴

定板在孵箱中35℃培养24h后读取MIC值,新生隐球菌培养72h后读取MIC值。

MIC值判定为肉眼观察到相当于生长对照有50%生长减少时的最低药物浓度。

结果表明:BG40018对念珠菌的MIC值≤0.125μg/mL,BG40018和阿尼芬净的活性

相当,MIC值差距在2个梯度以内。

两者对新生隐球菌和曲霉菌的体外抗真菌活性较弱。以上结果表明BG40018

对氟康唑敏感和耐药的念珠菌包括光滑念珠菌和克柔念珠菌均有较强的抗真菌

活性,活性与阿尼芬净相当。

2.BG40018体外抗真菌的时间-效应关系研究通过时间-杀菌曲线实验进一

步确认BG40018抗真菌活性以及作用的时效特点。将白色念珠菌SC5314,热带念

珠菌ATCC20026,克柔念珠菌ATCC2340和新生隐球菌H99菌悬液稀释至1×

105CFU/mL,加入2μg/mL的BG40018或阿尼芬净,35℃振荡培养,分别于0、4、8、

12、16和24h,所有菌液中各取100μL液体,以去离子水梯度稀释,从各时间点

菌液中各取100μL均匀涂铺于SDA固体培养基表面。

35℃培养48h后计数菌落数目。结果表明:BG40018和阿尼芬净对白色念珠

菌SC5314、克柔念珠菌ATCC2340和热带念珠菌ATCC20026均具有较强的抑菌作

用,BG40018处理24h后的菌落总数比阿尼芬净处理的下降了0.8～1.1Log10

CFU/mL。

两种药物对新生隐球菌H99抑菌效果较弱,但BG40018处理24h后的菌落总

数与阿尼芬净相比下降了0.4Log10CFU/mL,表明BG40018体外抗杀菌速率略好

于阿尼芬净。3.BG40018在小鼠体内的抗真菌活性研究为比较BG40