YY_T 1939-2024 医疗器械细菌内毒素试验方法 重组C因子法.docxVIP

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CCS?C?30

中华人民共和国医药行业标准

YY/T?1939—2024

医疗器械细菌内毒素试验方法

重组?C?因子法

t i c c tTes?forbacter

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国家药品监督管理局 发?布

YY/T?1939—2024

前 言

本文件按照?GB/T1.—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由国家药品监督管理局提出。

S本文件由全国医疗器械生物学评价标准化技术委员会(AC/TC248)归口。

S

本文件起草单位:山东省医疗器械和药品包装检验研究院、中?国?食?品?药?品?检?定?研?究?院、辽?宁?省?医?疗

器械检验检测院。

本文件主要起草人:孙令骁、邵安良、余洋、秦越、王小蕾、王诗琪。

Ⅰ

YY/T?1939—2024

引 言

细菌内毒素是革兰氏?阴?性?菌?细?胞?壁?的?重?要?成?分,通?常?由?多?糖?O?型?抗?原、核?心?低?聚?糖?和?类?脂?A?组

成,其中类脂?A?是内毒素的生物活性中心。从临床角度看,内毒素引起的脓毒症、脓毒性休克和多器官

衰竭是死亡率较高的全身性疾病。在自然界中,革兰氏阴性菌广泛分布?于?水(江?河?和?海?洋)、空?气、土?壤

和人体中,医疗器械制造过程中的高?压?蒸?汽?灭?菌、辐?照?和?气?体?灭?菌?能?够?杀?灭?细?菌,但?不?能?灭?活?内?毒?素。

由于细菌内毒素广泛存在于自然界中,性质稳定并且可以穿透常规的除菌滤膜,因此很难预防细菌内毒

素污染。

目前凝胶法和光度测定法是医疗器械细菌内毒素试验最主要的?试?验?方?法?之?一,该?方?法?具?有?较?高?的

灵敏性、特异性、准确性和经济性,但该方法需要使用大量的鲎血来生产鲎试剂,而东方鲎已成为我国的

二级保护动物,因此继续推广使用凝胶法和光度测定法不利于鲎资源的保护和发展。重组?C?因子法是

细菌内毒素检查法的一种补充方法,该方法的推广使用,可保护生态环境、减缓鲎资源枯竭速度,且本法

不存在?G?因子旁路干扰,具有较高的专属性。

Ⅱ

YY/T?1939—2024

医疗器械细菌内毒素试验方法

重组?C?因子法

1?范围

本文件描述了利用重组?C?因子法检测医疗器械中细菌内毒素含量的试验方法。

本文件适用于对医疗器械进行细菌内毒素的检测。

2?规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3?术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

13.

1

C?因子?factorC

鲎试剂中一种对细菌内毒素敏感,且能选择性识别内毒素的蛋白。

23.

2

重组?C?因子?recombinantfactorC

(?1)鲎试剂中的?C?因子?3.?通过基因重组技术在真核细胞中表达的重组蛋

(?1)

4?试验原理

重组?C?因子法是利用重组?C?因子试剂?与?内?毒?素?反?应?过?程?中?的?荧?光?信?号?变?化?而?测?定?内?毒?素?含?量?的

方法,重组?C?因子与细菌内毒素结合后被激活,由无活性的蛋白酶原转变成具有生物活性的蛋白酶,识

别并催化下游荧光底物产生荧光信号,荧光信号的强度和内毒素浓度成比例。分别测量重组?C?因子试

剂和供试品溶液孵育前后的荧光值并校正,通过标准曲线计算出供试品中细菌内毒素的含量。

5?主要设备

荧光酶标仪或多功能酶标仪、电热干燥箱、旋涡混合器等。

6?试剂和材料

细菌内毒素国家标准品或细?菌?内?毒?素?工?作?标?准?品?(以?下?简?称?“内?毒?素?标?准?品”)、重?组?C?因?子?试?剂

盒、细菌内毒素检查用水、移液器、吸头、微孔板。

注1:重组?C?因子试剂盒中一般包括重组?C?因子酶溶液、荧光底物、缓冲液等试剂。

2注2:试验所用耐热器具常用干热灭菌法,用电热干燥箱(50℃、至少30min)去除可能存在的外源性内毒素;塑料

2

器具如微孔板、与移液器配套的吸头等,选用标明无热原或内毒素含量0.05EU/mL?的器具。

1

????????????λ ………

????????????λ …………(1?)

7?供试品溶液的制备

以细菌内毒素检查用水为浸提介质,根据医疗器械的细菌内?毒?素?限?值?确?定?浸?提?介?质?最?大?体?积。按

1照公式()计算浸提介质最大体积。

1

V=?L

式中:

EV?———浸提介质最大体积,单位为毫升每件(mL/件);

E

L?———产品细菌内毒素限值,?U/件;

E3λ?———标准曲线上最低的内毒素浓度(不应低于所用重组?C?因子试剂的标示检测限),?U/mL。

E

3

浸提条件一般选择(7±1)℃浸提?不?少?于?1h,视?供