组蛋白提取试剂盒使用说明书.pdf

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组蛋白提取试剂盒说明书

货号：EX1521

规格：50T/100T

保存：2-8℃保存，有效期12个月。（酶以附件形式，收到货后尽快保存-20℃）

产品组成：

名称50T100T储存条件

试剂A：蛋白提取液A50mL100mL2-8℃

试剂B：蛋白提取液B25mL50mL2-8℃

试剂C：蛋白提取液C25mL50mL2-8℃

试剂D：蛋白提取液D7mL14mL2-8℃

试剂E：蛋白提取液E25mL50mL2-8℃

试剂F：蛋白溶解液F5mL10mL2-8℃

试剂G：蛋白酶抑制剂混合物500μL1mL-20℃

产品简介：

组蛋白提取试剂盒提供了一种简单且应用广泛的组蛋白方法。适用于从各种细胞

和各种组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、

肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取组蛋白。提取过程简单方便。组

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蛋白提取产物的产量大约0.4mg每10个细胞或100mg组织，不同的细胞和组织

中，产量差异很大。提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白质电泳、组蛋白

修饰实验比如乙酰化、甲基化等下游蛋白研究。

细胞组蛋白提取

1.提取液制备：每1mL蛋试剂A中加入10μL试剂G混匀后置冰上备用。

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2.收集5-10×10个细胞，在4℃，1000×g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养

基，尽可能吸干。

3.用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

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4.每5-10×10个细胞中加入1mL试剂A，混匀后，冰上裂解30min。

5.在4℃，800g条件下离心10min，弃上清，留沉淀。

6.加入500μL试剂B，800g，4℃，离心10min，弃上清，留沉淀。

7.用500μL试剂C重悬沉淀，冰上反应30min。

8.10000rpm，4℃，条件下离心5min，收集上清。

9.在上清中加入130μL试剂D充分混匀，冰上反应60min。

10.14000rpm，4℃，条件下离心10min，弃上清，留沉淀。

11.500μL试剂E洗沉淀2次。14000rpm，4℃，5min。

12.50μL试剂F溶解沉淀，加入LoadingBuffer缓冲液混匀后煮沸进行电泳检测，

或分装于-80℃冰箱保存备用，可直接用于下游实验。

组织组蛋白提取

1.提取液制备：每1mL试剂A中加入10μL试剂C混匀后置冰上备用。

2.取30mg组织样本剪碎，加入1mL试剂A，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼

可见固体。

3.将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，冰上裂解30min。

4.在4℃，800g条件下离心10min，弃上清，留沉淀。

5.加入500μL试剂B，800g，4℃，离心10min，弃上清，留沉淀。

6.用500μL试剂C重悬沉淀，冰上反应30min。

7.10000rpm，4℃，条件下