《牛乳及其制品中β-酪蛋白的测定》标准.pdfVIP

牛乳及其制品中β-酪蛋白的测定

1范围

本标准规定了牛乳及乳制品中β-酪蛋白的测定方法。

本标准第一法高效液相色谱法适用于生鲜乳和巴氏乳中β-酪蛋白、A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白含量

的检测，第二法毛细管电泳法适用于生鲜乳、液态乳、乳粉中β-酪蛋白、A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白含量

的检测。第三法液相串联四极杆质谱法适用于生鲜乳、液态乳、乳粉和婴幼儿配方粉中β-酪蛋白及其

A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白含量的检测，不适用于发酵乳制品和含水解或酶解乳清蛋白产品的检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

第一法高效液相色谱法

3原理

试样中β-酪蛋白及其A1β-酪蛋白、A2β-酪蛋白经缓冲溶液溶解后，采用C色谱柱分离，液相色谱仪

4

-紫外检测器检测，外标法进行定量。

4试剂和材料

4.1试剂

4.1.1乙腈（CHCN,CAS号：75-05-8）：色谱纯。

3

4.1.2三氟乙酸（CF3COOH,CAS号：76-05-1，纯度≥99.0%）：色谱纯。

4.1.3盐酸胍（CHClN,CAS号：50-01-1，纯度≥99.0%）。

63

4.1.4二硫苏糖醇（CHOS,CAS号：3483-12-3）。

41022

4.1.5柠檬酸三钠（CHONa,CAS号：68-04-2）。

6573

4.2试剂配制

4.2.1缓冲试剂配制：分别称取盐酸胍（4.1.4）5.732g，二硫苏糖醇（4.1.5）0.309g，柠檬三钠（4.1.6）

0.129g，加入适量的水溶解，转移至10mL容量瓶中，定容，混匀。

4.3标准品

3

4.3.1β-酪蛋白标准物质：纯度≥84%，含有标准物质证书。

4.4标准溶液配制

4.4.1β-酪蛋白标准物质储备液（100mg/mL）：准确称100mg（精确至0.1mg）β-酪蛋白标准物质

（4.3.1），用缓冲试剂1mL（4.2.1）溶解，混匀，制成质量浓度为100mg/mL标准储备溶液，现用现

配。

注：β-酪蛋白标准物质储备液实际浓度按照7.1计算。

4.4.2标准工作曲线的配制

分别准确吸取0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.8mL、1mLβ-酪蛋白标准物质储备

液（4.4.1）加缓冲溶剂（4.2.1）溶解，转移至10mL容量瓶中，定容，充分混匀。

注：标准工作液浓度实际浓度按照7.2计算。

5仪器和设备

5.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器。

5.2液相色谱柱：C4色谱柱（250mm×4.6mm，5μm，300Å）或等效色谱柱。

5.3分析天平：感量0.1g和0.01g。

5.4数控超声波清洗器。

5.5涡旋混合器。

5.6移液器：0.1mL~1.0mL。

5.7微孔过滤膜：0.45μm(水系)。

6分析步骤

6.1样品处理

称取1.0g试样(0.01g)加入缓冲溶液定容（4.2.1）至5mL容量瓶中，混匀，静置90分钟，取2mL离

心，经0.45μm(水系)滤膜过滤，供液相色谱仪分析。

6.2空白实验

除不称取试样外，均按上述步骤同时完成空白试验。

6.3液相色谱参考条件

6.3.1流动相A：0.1%三氟乙酸-水，流动相B：0.1%三氟乙酸-乙腈。

6.3.2流速：0.8mL/min。

6.3.3柱温：75℃。