粪便标本的细菌学检验.ppt

第三十三章

粪便标本的细菌学检查

序言腹泻一般分为如下几类：1．吸取不良性腹泻2．分泌性腹泻（产肠毒素性腹泻）3．侵袭性腹泻外广谱抗菌药物、放疗、化疗药物及激素类药物的长期不规范应用以及多种侵入性操作也可以引起继发性肠道感染。粪便的细菌学检查是诊断感染性腹泻的重要手段

第一节标本采集、运送和验收第二节细菌学检查第三节汇报与解释目录

第一节标本采集、运送和验收

采集指征标本的采集标本的运送标本的验收重点提醒

一、采集指征排便次数≥3次/日，粪便性状异常（稀便、水样便、粘液脓血便）排便时有腹痛、下坠、里急后重、肛门灼痛等症状发热、恶心、呕吐、食欲明显减少及全身不适等症状

二、标本的采集1．尽量在发病急性期和抗生素治疗前进行，以提高致病菌的检出率2．每天采集1份标本，持续3天，共采集3份标本

采集措施1．自然排便采集挑取有粘液、脓血部位的粪便或液体粪便取絮状物2～3ml，放置于无菌容器内，及时送检2．直肠肛拭采集合用于排便困难患者或婴幼儿，置于卡-布（Cary-Blair）运送培养基或磷酸盐甘油缓冲液（pH7．0）中送检二、标本的采集

三、标本的运送1．标本采集后应尽快送检室温保留≤2小时2．特殊细菌艰难梭菌培养标本在4℃环境≤24小时；弯曲菌与弧菌的标本需加入CaCl2(100mg/L)3．置于运送培养基中的直肠拭子保留时间室温≤24小时

四、标本的验收

检查申请单信息填写与否完整、对的，包括标本采集时间、采集方式、抗生素使用状况、标本量与否足够、标本容器有无渗漏等

拒收原则1．粪便标本放置时间超过2小时2．成形粪便或粪便标本混有尿液3．粪便标本量过少、干涸或保留不妥4．直肠拭子未置于运送培养基中应及时与临床医师联络，阐明原因，规定重新留取标本送检

第二节细菌学检查

检查程序检查措施显微镜检查培养和鉴定重点提醒

粪便或肛拭标本需氧培养根据临床特殊要求SS、XLD、麦康凯、血平板35℃培养18～24小时观察菌落特征、涂片染色生化反应初步鉴定血清学鉴定分离弯曲菌分离艰难梭菌分离弧菌分离致病大肠埃希菌O157Camp-BAP血琼脂35℃微需氧培养48小时观察菌落特征、涂片染色TCBS平板山梨醇麦康凯平板观察菌落特征、涂片染色血清学鉴定CCFA平板和厌氧血琼脂平板37℃厌氧培养48小时最终报告细菌鉴定药敏试验

图33-1一、检查程序

二、检查措施（一）显微镜检查粪便标本具有大量的正常菌群，大部分状况下仅依托染色性和形态很难辨别与否为病原菌，因此一般状况下粪便标本无需做涂片检查。仅在怀疑为霍乱弧菌、艰难梭菌、结核分枝杆菌感染以及菌群失调引起的腹泻时才进行显微镜检查

不染色标本1．霍乱弧菌感染标本呈米泔样或洗肉水样，镜检发现逗点状或弯曲状的弧菌，呈流星样穿梭，运动活泼。加入O1群或O139群霍乱弧菌多价诊断血清，不小于80%的细菌停止运动或运动明显减弱2．弯曲菌感染呈S形、螺旋形并迅速、拧塞样或投镖样运动的细菌3．酵母样真菌感染高倍镜发现光亮的卵圆形孢子或假菌丝

染色检查1．霍乱弧菌鱼群状排列的杆状或弧形革兰阴性杆菌2．空肠弯曲菌细小、长而弯曲，呈S形或螺旋形、海鸥状的革兰阴性弧菌3．艰难梭菌革兰阳性粗大杆菌、无荚膜、卵圆形芽胞位于菌体一端同步伴有炎症细胞4．酵母样真菌瓜子状革兰阳性孢子或假菌丝5．结核分枝杆菌抗酸染色发现红色抗酸杆菌

二、检查措施（二）培养与鉴定医院中引起的腹泻一般不会是感染了食源性病原菌引起，故对于住院超过3天的患者的粪便标本不进行常规培养，除非是为了分离艰难梭菌和测定毒素以诊断抗生素有关性腹泻。

（二）培养与鉴定1．沙门、志贺菌属菌培养黏液、脓血便接种于SS琼脂平板或XLD琼脂平板和麦康凯（MAC）琼脂平板（或中国蓝琼脂平板）以及血平板，35℃孵育18～24小时，挑取不发酵乳糖菌落，至三糖铁琼脂初步观测生化反应并进行血清学凝集试验。可根据生化反应成果初步判断细菌菌属，再根据血清学鉴定成果鉴定至种

2．肠病原性大肠埃希菌粪便标本接种于MAC或中国蓝琼脂平板、显色培养基及SMAC平板，35℃孵育18～24小时，挑取乳糖发酵（EIEC不发酵或缓慢发酵）菌落穿刺接种三糖铁琼脂和尿素动力靛基质培养基进行初步生化鉴定，并进行血清学分型。山梨醇-麦康凯琼脂平板可迅速分离EHEC。（二）培养与鉴定2.肠病原性大肠埃希菌引起腹泻的大肠埃希菌一般有5种类型，即产毒素大肠埃希菌（ETEC）、肠致病性大肠埃希菌（EPEC）、肠侵袭性大肠埃希菌（EIEC）、肠出血性大肠埃希菌（EHEC）以及肠汇集性大肠埃希菌（EAggEC）。粪便标本接种于MAC或中国蓝琼脂平板、显色培养基及SMAC平板，35°C培养