《仪器分析》课件——高液相色谱仪使用与操作规程.pptxVIP

高效液相色谱仪

使用与操作规程

目录准备01开机02清洗03注意事项04经验交流05

准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min配制样品和标准溶液，用合适的0.45μm滤膜过滤根据待检样品的需要更换合适的液相柱检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常一、准备

接通电源，依次开启不间断电源、四元泵、自动进样器、柱温箱、检测器，待泵和检测器，自检结束后，打开电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站二、开机

1.波长设定2.流速设定3.流动相比例设定4.梯度设定二、开机1、参数设定

1.将吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；2.顺时针转动泵的排液阀180°，打开排液阀；3.运行泵，泵以3ml/min的流速冲洗5min（可设定）后泵流速设为0ml/min；4.将排液阀逆时针旋转适度拧紧，关闭排液阀5.如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽二、开机2、更换流动相并排气泡

1、用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。2、检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除3、观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按检查管路后再操作4、观察基线变化。如果冲洗至基线漂移0.01mV/min，噪声为0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样二、开机3、平衡系统

1、进样前按软件中[零点校正]按钮校正基线零点2、用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量即可以进样了3、含量测定的对照溶液和样品供试溶液每份至少注样2次二、开机4、进样

1、系统适用性实验：①分离度：一般应≥1.5②重复性：两次谱图的峰面积应相差不的过1%③理论塔板数：应≥规定的理论塔板数目④拖尾因子：0.95＜T＜1.05⑤保留时间：对照与样品的主成分保留时间应大致一致⑥RSD：精密度＜3%2、结果计算①外标法，②内标法二、开机5、谱图的判断及结果计算

1、分析完毕后，先关检测器，再用经滤过和脱气的适当溶剂清洗色谱系统，正相柱一般用正已烷，反相柱如使用过含盐流动相，则先用水（5%甲醇），然后用甲醇-水冲洗，各种冲洗剂一般冲洗15～30分钟，最后用甲醇保留色谱柱，特殊情况应延长冲洗时间2、冲洗完毕后，逐步降低流速至0，关泵，进样器也应用相应溶剂冲洗，可使用进样阀所附专用冲洗接头3、关断电源三、清洗

先以所用流动相冲洗系统一定时间，正式进样分析前30min左右开启D灯或W灯，以延长灯的使用寿命建立色谱操作方法，注意保存为自己命名的Method，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果使用手动进样器进样时，在进样前和进样后，都必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，如长菌或脏了，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤实验结束后，一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上，再用甲醇冲洗。冲洗过程中关闭D灯、W灯关机时，自下而上关闭色谱仪各组件四、注意事项

流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用超纯水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇冲洗40分钟以上，以充分洗去盐分长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂(如甲醇)等清洗进样器五、经验交流

堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边清洗，然后插入新的流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下五、经验交流

谢谢！