- 1、本文档共7页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
第十九章遗传代谢性疾病的基因诊断
“十一五”规划教材全国高等医药教材建设研究会规划教材
第十九章遗传代谢性疾病
的基因诊断
第三军医大学府伟灵黄庆
主要内容
前言
一、基因诊断技术
二、遗传代谢性疾病的基因诊断
前言
●细胞、组织、器官和机体的生存与功能维持都必须
依赖不断进行的物质代谢过程。
●物质代谢包括合成代谢及分解代谢两个过程。
●代谢性疾病是物质代谢过程的紊乱,多为酶或蛋白
异常所致。
●根据代谢性疾病的病因,可将其分为原发性和继发
性。
一、代谢性疾病的分类
二、代谢性疾病的诊断手段
一、代谢性疾病的分类
原发性代谢性疾病:
又叫先天性代谢性疾病。是指当编码物质代谢所需酶或蛋白的基因发生突变、不能合成或合成了无活
性的产物时,就会导致有关代谢途径不能正常运转,
造成具有不同临床表型的各种代谢缺陷病。
继发性代谢性疾病:
继发性代谢性疾病是由其它原发性疾病导致的代谢性疾病,如糖尿病导致的继发性高脂血症。
二、代谢性疾病的诊断手段
●过去:主要依靠与物质代谢相关的各种酶的
生物化学方面的诊断
●现在:生化诊断+基因诊断
基因诊断的概念
基因诊断就是利用现代分子生物学和分子遗传学的
技术方法,直接检测基因结
构及其表达水平是否正常,
从而对疾病作出诊断的方法。
基因诊断的特点
●针对性强
●特异性高
●灵敏度高
●适用性强
●诊断范围广
第一节基因诊断技术
一.DNA测序技术
二.聚合酶链反应技术
三.毛细管电泳技术
四.基因芯片技术
一、DNA测序技术
所有生物基因组序列的数据均来自DNA测序
特点:
●稳定简便
●自动化程度高
●数据准确可靠
●公认为国际金标准
双脱氧链终止法
原理:
●测序基础是以ddNTP为
测序反应的链终止剂
●掺入到延伸链中的
ddNTP可阻止后续ddNTP
或dNTP的掺入
示例:BigDye?Terminators
●循环测序反应扩增到未端为BigDye?Terminators的
一系列的核苷酸链。
●循环测序反应产物经沉淀、洗涤和纯化,从而去除多
余的未反应的BigDye?Terminators。
●电泳与结果分析。
焦磷酸测序技术
原理:
引物与模板DNA退火后,在DNA聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶和三磷酸腺苷双磷酸酶等4种酶
的协同作用下,将每一个dNTP的聚合与一次荧光信
号的释放偶联起来,通过检测荧光的释放和强度,
以荧光信号的形式实时记录模板DNA的核苷酸序列。
AB
DNAPolymeraseACCTTGAATTCGTCCTAGGA……
GGATCTT……
dNTPApyrase
(d)NMP
PPi
ATP
ATP-sulphurylase
Luciferase
Light
CTGC
TTAA
AGTCAGTCAGTCAGTC
基本流程:第1步
一个特异性的测序引物和单链DNA模板结合,然后加入酶混合物(包括DNAPolymerase、ATPSulfurylase、
Luciferase和Apyrase)和底物混合物(包括APS和
Luciferin)。
基本流程:第2步
向反应体系中加入1种dNTP,如果它刚好能和DNA模板的下一个碱基配对,则会在DNA聚合酶的作用下,添加到测序引物的3’末端,同时释放出一个分子的焦磷酸(PPi)。
聚合酶
(DNA)n+dNTP(DNA)n+1+PPi
基本流程:第3步
在ATP硫酸化酶的作用下,生成的PPi可以和APS结合形成ATP;在荧光素酶的催化下,生成的ATP又可以和荧光素结合形成氧化荧光素,同时产生可见光。通过CCD光学系统即可获得一个特异的检测峰,峰值高低则和相匹配的碱基数成正比。
基本流程:第4步
反应体系中剩余的dNTP和残留的少量ATP在Apyrase的作用下发生降解。
dNTPdNDP+dNMP+Pi
ATPADP+AMP+Pi
ATP双磷酸酶ATP双磷酸酶
您可能关注的文档
- 多重PCR在线粒体基因突变聋病诊断中的应用.pdf
- 血红蛋白病的人群筛查和产前诊断.pdf
- 垃圾渗滤液中COD值与UV-254值的相关性分析.pdf
- 2006-2011年小升初民校联考数学试卷全集(含答案)(最新整理).pdf
- 2023国防知识竞赛小学组试题及答案.docx
- 大数据时代的社会治理困境及其对策.pdf
- 二元一次方程组的应用——和差倍分问题.docx
- 钢结构厂房施工进度计划表.doc
- 小升初简历模板1.doc
- 高中数学立体几何解题技巧.doc
- 中国国家标准 GB/T 4214.17-2024家用和类似用途电器噪声测试方法 干式清洁机器人的特殊要求.pdf
- GB/T 4214.17-2024家用和类似用途电器噪声测试方法 干式清洁机器人的特殊要求.pdf
- 《GB/Z 43202.1-2024机器人 GB/T 36530的应用 第1部分:安全相关试验方法》.pdf
- GB/Z 43202.1-2024机器人 GB/T 36530的应用 第1部分:安全相关试验方法.pdf
- 中国国家标准 GB/Z 43202.1-2024机器人 GB/T 36530的应用 第1部分:安全相关试验方法.pdf
- 中国国家标准 GB/T 32455-2024航天术语 运输系统.pdf
- GB/T 32455-2024航天术语 运输系统.pdf
- 《GB/T 32455-2024航天术语 运输系统》.pdf
- GB/T 44369-2024用于技术设计的人体运动生物力学测量基础项目.pdf
- 中国国家标准 GB/T 44369-2024用于技术设计的人体运动生物力学测量基础项目.pdf
文档评论(0)