分子生物学诊断技术在血栓-止血性疾病中的应用.ppt

主要内容;1.基因诊断;1.基因诊断;基因诊断的特点;基因诊断;2.血栓-止血相关疾病基因诊断必要性;分子生物学诊断技术的基本原理;核酸杂交技术（Hybridization）;核酸杂交技术（Hybridization）;聚合酶链反应（Polymerasechainreaction，PCR）;PCR（Polymerasechainreaction）：;PCR原理;PCR的应用;PCR的应用;DNA测序（DNASequencing）;等位基因特异性PCR（AS-PCR）和

PCR等位基因寡核苷酸技术;限制性片段长度多态性分析(RFLPs);限制性片段长度多态性分析(RFLPs);限制性片段长度多态性分析(RFLPs);基因连锁分析技术;基因连锁分析技术;基因连锁分析技术;PCR-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)

;PCR-单链构象多态性分析(PCR-SSCP);原理：

DNA双链的解链温度（Tm）取决于核苷酸顺序，基因突变的存在可使其所在区域的Tm值随之改变。

双链DNA置于含有递增浓度变性剂的PAGE中电泳，Tm值低的区域在较低变性剂浓度中先解链，Tm值高的区域后解链，解链可导致DNA迁移率下降。

根据DNA双链在DGGE中泳动速率的改变而推知Tm值发生了改变，进而找出突变型DNA。

;PCR-变性梯度凝胶电泳（PCR-DGGE）

评价与应用：

与SSCP相比之下，此法更精确，可检测片段长度达600bp。

反应条件初始化较为复杂。

凝胶制备要一定的设备。

难以检测GC含量丰富的DNA片段。;二、血栓-止血相关疾病及其分子生物学基础;;2.常见遗传性易栓症的分子基础;凝血酶原G20210A;;3.常见遗传性出血性疾病的分子基础;三、分子生物学诊断技术的应用;2.出血性疾病的基因诊断;HA的临床;HA的常规诊断;HA的分子生物学特性;血友病A的基因诊断;血友病A的基因诊断;先证者的未知突变筛选（直接诊断）;图内含子22倒位的机理;内含子22倒位的检测方法1

——Southern印迹法;内含子22倒位的检测方法2——长距离PCR;长距离PCR;图LD-PCR分析

M：标准；II-1：先证者之父亲；II-2：先证者之母亲；III-1：先证者；III-2：母亲正孕的男孩;血友病A的基因诊断;;图BclIRFLP分析结果

M：标准；II-1：先证者之父亲；II-2：先证者之母亲；III-1：先证者；III-2：母亲正孕的男孩;图St14VNTR分析结果

M：标准；I-1：先证者之外公；I-2：先证者之外婆；II-1：先证者之父亲；II-2：先证者之母亲???II-3/4：II-2的姐妹；III-1：先证者;;诊断策略;方法选择;标本来源;HB的临床;HB的分子生物学特性;图FⅨ基因及蛋白结构示意图;HB的常规诊断;HB的基因诊断;RFLP联合分析的PIC;小结;vWD的常规诊断;vWD的基因诊断;THANKYOU!!