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Photometry
BasicTechnologyTraining
BTTPhotometryv3WhichanalyzersusePhotometryasameasurementprincipleHitachi917/902/911/912ModularDModularPc111,c311Cobas6000(c501)
BTTPhotometryv3Photometryisthemostusedmeasurementprincipleinclinicallaboratories.Mostchemicalreactionsaredesignedtoendina“coloured”productPhotometryisthe“Measurementoflight“Lightabsorbanceofmoleculesaremeasuredwithinthevisibleand
ultra-violet(UV)spectralrange.Definition
BTTPhotometryv3SpectrophotometryAcuvettecontainingsolutionisplacedinthelightpathofaspectrophotometer.Asthelightabsorbingcolourcomponentincreases,morelightisabsorbed–thismeansthatlesslightistransmittedPercenttransmittancevarieslogarithmicallywithconcentrationoftheabsorbingmaterialTransmittance/absorbancemeasurementsnecessarytocalculateconcentrationofananalyteinsolution.
BTTPhotometryv3Absorbance(Abs)ismoreconvenienttocalculateconcentrationthantransmittance%.TheAbsorbanceisdirectlyproportionaltoconcentration. SpectrophotometryConc.T=0.5T=0.25T=0.125Conc.Log2=0.30Log4=0.60Log8=0.90Absorbance A=-logTTransmission%T=I/I0*100
BTTPhotometryv3Lambert-Beer’sLaw 1:1relationship 1:1.5relationshipBotharelinearrelationships
BTTPhotometryv3Lambert-Beer’sLawTheLambert-BeerlawdescribesthelinearrelationshipbetweenabsorbanceandconcentrationThemeasuredabsorbanceAA=ε*c*lc: concentrationofthedissolvedsubstanceε: molarabsorbancecoefficientl: lightpathofthecuvetteεandlareconstantstherefore Abs∝conc
BTTPhotometryv3Lambert-Beer’sLawIftheabsorptivitycoefficient(ε)isnotknown,thentocalculateunknownconcentrationacalibrationcurveisneededCalibrationcurve=absorbancesofsolutionsofknownconcentrations Concentration(amountofsubstance)Absorbance(amountofcolor)401 2 3 4 5 6706050302010Calibrator/standard(cfas)Unkno
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