一例猪蓝耳病的实验室诊断及NSP2、ORF5基因序列分析 (2).pdf

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VETERINAR

一例猪蓝耳病的实验室诊断及NSP2

ORF5基因序列分析

李原野’，李凤琴。徐志文，朱玲。

(1．西昌学院动物科学院。g!t)lI西昌615000，2．E]JII农业大学动物医学院，EtJIl成都611130)

摘要：为诊断四川眉山某猪场暴发的疑似猪蓝耳病。利用RT-PCR方法对其进行分子诊断，在确认为阳性结果的基础

上针对PRRsV的ORF5~DNsp2基因分别设计特异性引物，扩增基因片段进行测序然后对其进行遗传进化分析。结果表

明，该疫情由PRRsV引起，遗传进化分析表明该PPRSV毒株的ORF5和Nsp2无明显变异，现有防控措施有效。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征；ORF5；Nsp2；RTPCR诊断

猪蓝耳病亦称猪繁殖与呼吸综合征(Eppendorf，德国)、GelDoc2000凝2XPCRMasterMix25uL，Jt-补加无菌

是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)胶图像分析系统(BIO—RAD，美国)、水至50L，混后置PCR仪中按照以

引起的猪繁殖障碍和呼吸道传染病，临2XTaqPlusPCRMasterMix(含染料)下程序进行扩增：95℃，lmin；95℃，

床主要表现为妊娠母猪繁殖障碍，妊娠购自天根生化科技(北京)有限公司，5S，57℃10S，72℃l0S，40个循环；

母猪流产、弱胎、死胎、木乃伊胎I1I；反转录试剂盒、TakaRaTaqDNA酶和72℃lmin；PCR结束后取5L进行琼

仔猪主要表现为间质性肺炎等症状121。DL2000DNAMarker(宝生物工程大脂糖凝胶电泳检测目的条带。

本病干20世纪80年代在美国首次流行连有限公司)。1．6Nsp2和ORF5基因扩增

以来，迅速传遍世界主要养猪国家，中1．3引物设计与合成以1．5反转录的cDNA为模

国于1995年发现该病131，是威胁我国当本实验所使用引物如表1所示，所板，分另U加入Nsp2l、Nsp22引

前养猪业持续健康发展的主要疫病之一，有引物由生工生物工程(上海)股份有物和ORF5l、ORF5—2引物，

加强该病的分析趼究和综合防控，对生限公司合成。2×PCRMasterMix25I，并十l、力口

猪生产稳定发展意义重大。2016年l2月，表1PCR检测及基因组序列扩增所使用引物无菌水至50L，扩增Nsp2高变区和

川…某猪场暴发疑似猪繁殖与呼吸ORF5基因。

综合征疫情，发病猪呼吸困难，剖检肺1_7克隆与鉴定

P3atgtccgagatttcactcagg变异株180bpPCR扩增结束后用1o,6琼惜糖凝

部病变明显，送至四川I农业大学动物生。

Nsp2—1tgaytggra1gngtgclycc1gg

物技术中心进行实验室检测。1107bDH交电泳、电10HDV、30～50rain

Nsp2-2algcgagaragccaytcctgcgt

1材料与方法ORF5—1cctgagaccalgaggtgggg后观察结果，按照胶收试剂盒

564bp

1．1临床样品采集