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猪场兽医
VETERINARY
一例猪蓝耳病的实验室诊断及NSP2、
ORF5基因序列分析
11*22
李原野，李凤琴，徐志文，朱玲
(1.西昌学院动物科学院，四川西昌615000，2.四川农业大学动物医学院，四川成都611130）
摘要：为诊断四川眉山某猪场暴发的疑似猪蓝耳病。利用RT-PCR方法对其进行分子诊断，在确认为阳性结果的基础
上针对PRRSV的ORF5和Nsp2基因分别设计特异性引物，扩增基因片段进行测序然后对其进行遗传进化分析。结果表
明，该疫情由PRRSV引起，遗传进化分析表明该PPRSV毒株的ORF5和Nsp2无明显变异，现有防控措施有效。
关键词：猪繁殖与呼吸综合征；ORF5；Nsp2；RT-PCR诊断
猪蓝耳病亦称猪繁殖与呼吸综合征（Eppendorf，德国）、Gel Doc 2000 凝2×PCR Master Mix 25μL，并补加无菌
是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）胶图像分析系统（BIO-RAD，美国）、水至50μL，混匀后置PCR仪中按照以
引起的猪繁殖障碍和呼吸道传染病，临2×Taq Plus PCR MasterMix（含染料）下程序进行扩增：95 ℃，1 min;95 ℃，
床主要表现为妊娠母猪繁殖障碍，妊娠购自天根生化科技（北京）有限公司，5 s,57 ℃ 10 s,72 ℃ 10 s,40个循环；
[1]
母猪流产、弱胎、死胎、木乃伊胎；反转录试剂盒、TakaRaTaqDNA酶和72 ℃ 1 min; PCR结束后取5μL进行琼
[2]
仔猪主要表现为间质性肺炎等症状。DL 2 000 DNA Marker（宝生物工程大脂糖凝胶电泳检测目的条带。
本病于20世纪80年代在美国首次流行连有限公司）。1.6Nsp2和ORF5基因扩增
以来，迅速传遍世界主要养猪国家，中1.3引物设计与合成以1.5反转录的cDNA为模
国于1995年发现该病[3]，是威胁我国当本实验所使用引物如表1所示，所板，分别加入Nsp2-1、Nsp2-2引
前养猪业持续健康发展的主要疫病之一，有引物由生工生物工程(上海)股份有物和ORF5-1、ORF5-2引物，
加强该病的分析研究和综合防控，对生限公司合成。2×PCR Master Mix 25μL，并补加
猪生产稳定发展意义重大。2016年12月，表1PCR检测及基因组序列扩增所使用引物无菌水至50μL，扩增Nsp2高变区和
四川眉山某猪场暴发疑似猪繁殖与呼吸引物序列用途ORF5基因。
综合征疫情，发病猪呼吸困难，剖检肺P1aattcccgcacctcgcggaactgtPCR检测，经1.7克隆与鉴定
典株267 bp，
部病变明显，送至四川农业大学动物生P3atgtccgagatttcactcagg变异株180 bp。PCR扩增结束后用1%琼脂糖凝
物技术中心进行实验室检测。Nsp2-1tgaytggratgttgtgctycctgg1 107 bp胶电泳、电压100 V、30～50 min
Nsp2-2atgcgagaragccaytcctgcgt
1材料与方法ORF5-1cctgagaccatgaggtgggg后观察结果，按照胶回收试剂盒
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