薄层色谱法(共66张课件).pptxVIP

薄层色谱法;1938年俄国人首先实现了在氧化铝薄层上分离一种天然药物。1965年德国化学家出版了“薄层色谱法”一书，推动了这一技术的发展。

因TLC法设备简单，分析速度快，分离效率高，结果直观，很快被用作定性和半定量的方法。

70年代中后期发展了高效薄层色谱。80年代以后发展了薄层色谱光密度扫描仪，和各步操作的仪器化，并实现了计算机化。;2021/12/19;色谱概念;1.2色谱的发展史;几类色谱分离法的比较;色谱的其他分类方法;按操作方式不同;平面色谱分类;薄层色谱法基本原理;7.2薄层色谱法参数;L0;2.相对比移值Rs(relativeRf；Rr);相对比移值(Rr);（二）面效参数（理论塔板数和塔板高度）;1.分配系数K（distributioncoefficient）

K=cs/cm

溶质在固定相与流动相浓度比值

2.容量因子

k=CsVs/CmVm=K(Vs/Vm)

固定相中溶质总量与流动相中溶质总量之比;;;相平衡参数;K、k与Rf值的关系推导;（三）相平衡参数;讨论

⑴Rf与K有关，即与组分性质（溶解度）以及薄层板

和展开剂的性质有关，K↑大，Rf↓小

⑵薄层板一定，Rf只与组分性质有关，对于极性组分，

展开剂极性↑大，Rf↑大（容易洗脱）

展开剂极性↓小，Rf↓小（不容易洗脱）

⑶Rf＝1K或k=0组分在前沿

Rf＝0K或k=∞组分在原点;（四）分离参数;2.分离数(separationnumber;SN);7.3吸附薄层色谱法;1.定义固定相（吸附剂或载体）涂布成一均匀薄层，点样，（密闭的容器中）展开，斑点显色，（与对照物质）比较进行定性定量。;概述;;一、薄层色谱系统;(2)表面改性固定相

疏水改性硅胶——化学键合烷基

亲水改性硅胶——引入氨基、氰基、二羟基等，薄层板极性介于极性吸附剂和疏水改性剂之间（极性次序：硅胶﹥氨基﹥氰基﹥二羟基﹥反相）。

表面改性纤维素——乙酰化纤维素

药典收载的固定相有：硅胶类、硅藻土类、氧化铝类、微晶纤维素类等。颗粒直径一般要求10–40μm。;2.载板

——玻璃板，放在饱和碳酸钠溶液中浸泡数小时，除去玻璃表面的油污。然后充分漂洗干净，干燥，置干燥器中备用。要求光滑、平整、洗净后不附水珠。

;3.黏结剂

???机黏结剂——石膏（硫酸钙），

“G”表示添加石膏的吸附剂。

“H”表示没有黏结剂的吸附剂。

无机黏结剂的优点是：耐高温，耐酸碱，但涂铺薄板动作要快，否则匀浆易凝固。薄层强度差。

有机黏结剂——羧甲基纤维素钠（CMC）、淀粉、聚乙烯醇、高分子聚合物等。其特点是薄层强度高、使用方便，但不能用浓硫酸作显色剂。;

荧光黏结剂——在吸附剂中添加某种荧光指示剂，常用的荧光指示剂

以“F”表示含有荧光指示剂的商品吸附剂，并以下标注明其激发光波长。例硅胶HF254

在254nm紫外光下发蓝色荧光的有钠荧光素、硫化镉、阴极绿等。

在366nm有荧光的指示剂如彩蓝等。;薄层板涂铺要求：均匀、平整、无气泡引起的凹坑和龟裂。例：

硅胶板（粒度10～40um）

硅胶G——将硅胶置研钵中，加入少量水，研磨均匀，至无结块和气泡，再加入比例量的水(一般为1份固定相与3份水)，迅速研磨均匀，立即涂铺。

硅胶或硅胶H——以CMC为黏合剂。配制0.2%～0.7%CMC水溶液,放置过夜,使悬浮的纤维沉降,取上层用来配制吸附剂匀浆。

;4.薄层板活化

涂布后的薄层先在室温下阴干，在使用前置适当温度烘烤一定时间进行活化，然后置干燥器中备用。不同薄层活化条件略有不同，如：

硅胶110℃1h

氧化铝110℃30min;5.点样

样品的溶剂_____高度挥发性和尽可能非极性，否则易使斑点扩展。

多次点加法

点样量适中_____过载会引起斑点拖尾，分离度变差，以最小检测量的几倍～几十倍为宜。

手工点样工具_____定容玻璃毛细管（1–5ul），微量注射器。;自动点样

LimomatIV喷样仪——样品溶液通过气流成雾状喷向薄层，移动板台，使在薄层上流下样品条带。

特点：适合于大量稀样品溶液的喷加；条带宽度不超过2mm，有利于改善分辨率；便于狭缝式光密度计扫描；要求薄层板强度高。

自动薄层色谱点样仪——由计算机控制。

药典规定：点样基线距底边2.0cm,样点直径2-4mm,点间距离约为。;展开：层析缸，预饱和，防止边缘效应