05基因诊断近年原文.ppt

检测标本痰液、咽拭子、鼻拭子、支气管肺泡灌洗液、血浆、粪便。检测方法1.逆转录-巢式PCR(Reverse-NestedPCR)2.逆转录-实时PCR(Reverse-RealtimePCR)有报道显示，在可能SARS病人中病毒的检出率为100%。在疑似SARS病人中的检出率为23%。所有健康接触者中未检测到病毒。HPV基因的检测在预防宫颈癌中的作用宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，发病率在女性恶性肿瘤中居第二位，每年约有50万左右新发病例。我国每年有新发病例约13.15万，占世界宫颈癌新发病例总数的26%。持续的人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)感染是引起宫颈癌和癌前病变的必要因素，93.0%-99.7%的宫颈癌组织中均可检测到HPVDNA。高危型HPV-16和HPV-18分别占宫颈癌的50%和14%。高危型HPV的持续感染可使患宫颈癌的风险增加250倍。HPVDNA的检测方法实时定量PCR(RealtimePCR)核酸杂交捕获（HybridCaptureⅡ，HCⅡ）HCⅡ可一次检测所有致癌的13种高危型HPV。敏感度：对CIN(癌前病变)Ⅱ、Ⅲ和癌的检出率为98%。阴性预期值：对高度鳞状上皮细胞病变或更高度病变的阴性预期值99.9%细胞学检查结果为意义不明确的非典型细胞时，HPV基因的检测能预测受检者患宫颈癌的风险。细胞学检查+HPV基因的检测是宫颈癌前病变和宫颈癌筛查的最佳方法，成为预防宫颈癌的关键。结合分歧杆菌的基因检测结核分歧杆菌MTb，俗称结核杆菌TB，是结核病的致病菌。带病菌的痰液是TB主要的传染源。MTbH37Rv基因组结构：环状双链DNA，共4411529kb，富含重复序列尤其是插入序列、多基因的家族序列及重复的管家基因序列。TB分子诊断方法1临床标本处理：标本：痰、胸腹腔积液、血清、尿液、脑脊液处理：液化剂去除粘蛋白，若带血则用红细胞裂解液去除血红蛋白，提取DNA。TB分子诊断方法2常用的是靶分子扩增方法：直接PCR法、SDA法、LCR法扩增片段：抗原蛋白编码基因-165bp、MBP64-240bp、IS6110-123bp、IS986-245bp、16SDNA-584bpTB的种属鉴定：以16SrRNA为靶基因美国FDA：Amplicor检测和MTD检测TB分子诊断方法3耐药性检测耐药性分子基础：利福平是抗结核治疗的关键药物。耐药的分子基础是RNA聚合酶的突变，主要集中在rpoB基因的81bp区域。耐药性鉴定：PCR-SSCP法和点突变的检测法*****血友病A（HemophiliaA,HA）99bp43bp142bpBclIBclI142bp血友病A（HemophiliaA,HA）遗传病的诊断时机1.症状前诊断（Asymptomaticdiagnosis）2.产前诊断（Prenataldiagnosis）3.着床前诊断（Preimplantationdiagnosis）产前诊断PrenatalDiagnosis遗传学检查细胞培养、染色体检查、分子诊断等生化检查特殊蛋白质、酶、代谢底物、中间产物和终产物等物理诊断B超、X线、胎儿镜、电子监护等羊膜穿刺妊娠16-20周绒毛取样妊娠9-12周invasiveprenataldiagnosisOthersourcesoffetaltissueforPNDDifficulttoisolateandpersistforyearsafterpregnancyFetalcellsinmaternalcirculation erythroblasts trophoblasticcells leucocytesCellfreefetalDNAinthematernalcirculationDetectablefrom5weeks’Clearedfromcirculationwithin30minutesofdelivery3–6%oftotalcirculatingcellfreeDNAOriginatesfromtrophoblastQuantificationandnormalranges25.4ge/ml3.4%292.2ge/ml6.2%05010015020025030011-17weeks37-42