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萌发麦苗淀粉酶活力及水溶性蛋白含量的测定-实验报告--第1页
萌发麦苗淀粉酶活力及水溶性蛋白含量的测定
一、研究背景及目的
酶是由生物体内活细胞产生的一种生物催化剂。大多数由蛋白质组成(少数为RNA)。
能在机体中十分温和的条件下,高效率地催化各种生物化学反应,促进生物体的新陈代谢。
生命活动中的消化、吸收、呼吸、运动和生殖都是酶促反应过程。酶是细胞赖以生存的基础。
细胞新陈代谢包括的所有化学反应几乎都是在酶的催化下进行的。因此,对酶的研究是十分
重要的。通过对酶活性的测定,可以更好地了解生物体的代谢过程。
其中,淀粉酶是水解淀粉和糖原的酶类总称,可以分成α-淀粉酶,β-淀粉酶等。α-
淀粉酶既作用于直链淀粉,亦作用于支链淀粉,无差别地随机切断糖链内部的α-1,4-链。
β-淀粉酶与α-淀粉酶的不同点在于从非还原性末端逐次以麦芽糖为单位切断α-1,4-葡聚
糖链。根据其催化产物的特点和现有测定方法规定酶活力单位为:每分钟每克鲜重麦种所
催化产生的麦芽糖毫克数。
3,5-二硝基水杨酸法是一种对还原糖定量测定的方法。还原糖和碱性二硝基水杨酸试
剂一起共热,产生一种棕红色的氨基化合物,在一定的浓度范围内,棕红色物质颜色的深浅
程度与还原糖的量成正比。因此,我们可以测定样品中还原糖以及总糖的量。麦芽糖是还原
性糖,可用该方法对其含量进行测定。
本次实验的目的在于通过实验过程,理解淀粉酶测定的原理,熟悉实验操作,掌握实验
方法。
蛋白质是生物体中广泛存在的一类生物大分子,它是与生命及与各种形式的生命活动紧
密联系在一起的物质,对生物来说十分重要。目前有四种蛋白质含量测定方法:凯氏定氮、
Folin-酚法、染料结合法、紫外法,最常用的是后三种。
本次实验选择通过Folin-酚法测定蛋白质含量。这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。
过去此法是应用最广泛的一种方法,由于其试剂乙的配制较为困难,近年来逐渐被考马斯亮
兰法所取代。
萌发麦苗淀粉酶活力及水溶性蛋白含量的测定-实验报告--第1页
萌发麦苗淀粉酶活力及水溶性蛋白含量的测定-实验报告--第2页
二、实验原理
该实验的总体思路为精确控制酶促反应的条件,保持其处于最适条件,测定酶促反应
的初速度来表示酶的活力。以及通过化学反应使得蛋白质具有特异光吸收,再通过比色法测
定蛋白质含量。
该实验的理论基础为:
(1)酶的性质:淀粉酶是蛋白质,在一定的条件下会发生钝化,可利用此性质将体系中的
非目标酶类钝化,从而测出目标酶类的活力;
(2)3,5-二硝基水杨酸法:3,5-二硝基水杨酸法是一种对还原糖定量测定的方法。还原糖
和碱性二硝基水杨酸试剂一起共热,产生一种棕红色的氨基化合物,在一定的浓度范围内,
棕红色物质颜色的深浅程度与还原糖的量成正比。因此,我们可以测定样品中还原糖以及总
糖的量。麦芽糖是还原性糖,可用该方法对其含量进行测定。具体反映为:
在加热、碱性条件下:3,5-二硝基水杨酸(黄色)+还原糖—→3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红
色)+糖酸;
(3)比色法原理:朗伯—比尔定律(当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的吸光物
质时,与其吸光度A与吸光物质的浓度c及吸收层厚度b成正比)。
三、仪器试剂
1、仪器设备:上海精宏实验设备有限公司DK-S24型40℃水浴锅;天津市中环实验电炉有
限公司22列八孔型70℃电热恒温水浴锅;上海安亭科学仪器厂TDL-408型低速离心机;上
海精密科学仪器有限公司722型光栅分光光度计;DCL-2000DY型电磁炉(佛山市爱庭电器
有限公司)。
2、主要实验器皿:50ml容量瓶,100ml容量瓶,研钵一套,具塞刻度试管若干,试管若干
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