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8SDS电泳
适用与Bio-RadMiniProtean3类电泳槽
一、准备工作
1试剂
蛋白marker；丙烯酰胺；双丙烯酰胺；Tris碱；甘氨酸；甲醇；冰乙酸
SDS；过硫酸铵；甘油；溴酚蓝；β-巯基乙醇；考马斯亮蓝R-250；TEMED；
正丁醇
2仪器与耗材
电泳系统；移液枪；电子天平；pH计；恒温加热器；EP试管；量筒
（500ml,250ml,100ml,20ml）；烧杯（500ml,50ml）；玻璃引流棒；储液瓶；
二、操作步骤
a.灌制分离胶(6cm×8cm×1.5mm):
1.组装好凝胶模具，确保不会发生凝胶渗漏。
2.凝胶配制所用组分如下：按10%配制
配制Separatinggel所需各成分的体积/mL
15%12%10%
2gels1gel2gels1gel2gels1gel
○130%acrylamidemix105846.663.33
○21.5MTri,pH8.852.552.552.5
○3ddHO4.82.46.83.48.044.02
2
○410%SDS0.20.10.20.10.20.1
○510%APS0.10.050.10.050.10.05
○6100%TEMED0.010.0050.010.0050.010.005
Total201020102010
○1○2○3○4○5○6
（注：先加入，然后再从冰箱取出加入）
○5○6
3.加入APS和TEMED后，轻轻振荡烧杯使其混匀。
（注：一定要将加入的溶液充分混匀，以免胶凝固的不均匀）
4.小心地用移液器将分离胶沿隔片加入模具。
（注：动作缓慢，以免产生气泡）
5.当加入的凝胶溶液7.4mL时，轻轻在溶液上覆盖一层1mL正丁醇饱
和的水，使胶面平整。
6.等40min，待凝胶聚合后，在分离胶和水之间会出现一个清晰的界面。
（注：此时可制备蛋白样品。具体见“c.样品的制备”）
b.灌制浓缩胶
1.浓缩胶配制所需组分如下：按3.9%配制
配制Stackinggel所需各成分的体积/mL
5%3.9%
2gels1gel2gels1gel
○130%acrylamidemix1.70.851.30.65
○20.5MTri,pH6.82.51.252.5
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