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1：核酸抽提原理

简单地讲，核酸抽提包含样品的裂解和纯化两大步骤。裂解是使样品中的核酸游离在裂解

体系中的过程，纯化则是使核酸与裂解体系中的其它成分，如蛋白质、盐及其它杂质彻底

分离的过程。

经典的裂解液几乎都含有去污剂(如SDS、TritonX-100、NP-40、Tween20等)和

盐(如Tris、EDTA、NaCl等)。盐的作用，除了提供一个合适的裂解环境(如Tris)，还

包括抑制样品中的核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏(如EDTA)、维持核酸结构的稳定

(如NaCl)等。去污剂则是通过使蛋白质变性，破坏膜结构及解开与核酸相连接的蛋白

质，从而实现核酸游离在裂解体系中。裂解体系中还可能加入蛋白酶；利用蛋白酶将蛋白

质消化成小的片段，促进核酸与蛋白质的分开，同时，也便于后面的纯化操作以及获得更

纯的核酸。也有直接使用高浓度的蛋白质变性剂(如GIT、GuHCl等)裂解的，该方法已

经成为了RNA抽提的主流，却不是基因组DNA抽提的主流。

最常用的纯化方法，一是PC抽提+醇沉淀，二是介质纯化。第一种方法是利用PC对裂

解体系进行反复抽提以去除蛋白质，实现核酸与蛋白质的分离；再用醇将核酸沉淀下来，

实现核酸与盐的分离。第二种方法则是利用某些固项介质，在某些特定的条件下，选择性

地吸附核酸，而不吸附蛋白质及盐的特点，实现核酸与蛋白质及盐的分离。高盐沉淀去除

蛋白质是第一种纯化方法的一个变体，省略了PC操作的麻烦。当然，也有不纯化的抽提

方法，但是用途多局限于简单的PCR。其它杂质–如多糖、多酚等-的去除，基本上都

是在这两种方法的基础上，通过增加一些特别的试剂，或者增加一些额外的步骤来实现

的。

2：了解你的实验样品

如果你研究某个实验样品，并且要抽提它的核酸，以下的信息一定要先行收集：该样品的

核酸含量、酶含量、特殊杂质含量。如果你对样品的特点一无所知，当样品稍微有一点复

杂时，抽提核酸的实验就会碰到许多问题。以血液为例，如果你不知道鸟的血液中有核细

胞的含量是人血的千倍左右，而使用人血一样的起始量去抽提鸟血的基因组DNA，怎么

可能成功？失败了又怎么知道原因所在？同时，只有对实验样品有所了解，才能正确选择

裂解方法。

绝大部分情况下，使用新鲜样品可以获得最好的结果。对一些杂质含量高的样品，如果使

用新鲜样品抽提基因组DNA是碰到杂质残留过大的问题，可以试一下-20C保存一天后

再抽提的对策，可能会有意想不到的效果。样品如果因为某些原因必须先行保存，也要先

简化一下样品：血液最好只保存有核细胞；将样品分割后保存，避免反复冻融。如果实验

室不具备合适的保存条件，将样品先裂解后再保存，是一个不错的选择。

3：裂解方法的评价

含蛋白酶的裂解方法，可以认为是抽提基因组DNA的首选。裂解包括膜蛋白的游离和与

基因组DNA相连接的蛋白质的游离。蛋白酶的作用是使蛋白质变小，故而对蛋白质的游

离有巨大的促进作用；同时，巨大的基因组DNA是很容易“缠”住大分子的东西的，蛋白

质被蛋白酶消化变小后，则不容易被基因组DNA“缠”住，有利于蛋白质在纯化操作中的

去除，使最终获得的基因组DNA的纯度更高。另外一个思路是，如果基因组DNA与蛋

白质“缠”在一起，在纯化的过程中有两种可能：如果基因组DNA的特性占优势，则纯化

时以DNA的形式被保留下来，导致蛋白质的残留；如果蛋白质的特性占优势，则纯化时

以蛋白质的形式被去除，导致DNA的损失。有些样品，如肌肉，即使是RNA抽提，也

强烈建议使用含蛋白酶的裂解液(或者在操作中的某个时候使用蛋白酶消化蛋白质)，原

因在于这些样品中的蛋白质，是非常难以去除的。该方法是获得最大得率和最高纯度的基

础。

不使用蛋白酶的去污剂裂解方法，仍然在细胞基因组DNA