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微生物学实验报告——双歧杆菌分离--第1页
微生物学实验报告——双歧杆菌的分离纯化
微生物学实验报告
乳酸菌分离纯化——双歧杆菌的分离纯化
2012/6/5
实验目的：从酸奶等富含乳酸菌的物质中分离到具实验材料：蒙牛冠益乳（含bb-12双歧杆菌），伊利
有活性的双歧杆菌并进行初步鉴定。酸牛奶（ABLS益生菌），佳宝、光明原味酸牛奶，
实验原理：双歧杆菌是动物体肠道内的正常优势生双歧杆菌乳酸菌三联活菌片（含长型双歧杆菌
理细菌，革兰氏阳性，无芽孢，没有运动能力，最BifidobacteriumlongumBacillus
），枯草芽孢杆菌（
适生长温度37℃~41℃，专性厌氧。双歧杆菌的细胞subtilis
）
呈现多样形态，有短杆较规则形、纤细杆状具有尖实验方法：
细末端形、球形、长杆弯曲形、分枝或分叉形、棍1.培养基
棒状或匙形。单个或链状、V形、栅栏状排列，或聚双歧杆菌琼脂培养基【蛋白胨（鱼粉）10.0g，牛肝
集成星状。双歧杆菌的菌落光滑、凸圆、边缘完整、浸粉5.0g，牛肉膏3.0g，酵母浸粉5.0g，胰蛋白胨
乳脂至白色、闪光并具有柔软的质地(7)。8.0g，可溶性淀粉0.5g，磷酸氢二钾1.0g，磷酸二氢
因为双歧杆菌是严格厌氧细菌，所以双歧杆菌钾1.0g，葡萄糖10.0g，乳糖3.0g，L-半胱氨酸0.5g，
的培养条件必须无氧，且培养基要具有低氧化还原琼脂15g，吐温801g，溶液A（FeSO·7HO0.2g，
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电势。培养双歧杆菌最常用的方法是亨盖特厌氧滚MgSO·7HO4.0g，MnSO·4HO0.135g，NaCl0.2g
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管法(1,5,7)，此外还有厌氧箱法，厌氧袋法和厌氧于100ml蒸馏水定容）10ml，蒸馏水定容至1L】
罐法等。亨盖特厌氧滚管法是亨盖特（Hungate）于枯草芽孢杆菌LB琼脂培养基【胰蛋白胨10g/L，酵
1950年发展起来的一套严格厌氧微生物的培养技术，母浸粉5g/L，Nacl10g/L，琼脂粉15g/L】
主要原理是利用铜柱氧化除氧的滚管分离纯化法。2.简易厌氧罐法
亨盖特厌氧滚管法的优点是可以实时检查培养物，将双歧杆菌琼脂培养基倒入培养皿中，待培养基冷
无氧效果好且花费不高，但需要专门的仪器和技术却后，先用接种环取LB琼脂培养基上生长的枯草芽
性很强的操作。本实验采用的简易厌氧罐法是一种孢杆菌菌落接种在培养皿一侧，再于另一侧划线接
操作简单且成本很低的方法，主要原理是利用焦性种酸奶或三联活菌片的稀释液，按照每L容积1.0g
没食子酸除去厌氧罐内的氧气。该方法的缺点是焦焦性没食子酸、10%NaOH溶液10ml加入厌氧罐后，
性没食子酸与NaOH反应过程中会产生一定量的立即以凡士林和
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