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炭疽标本采集及检测流程

炭疽标本采集

材料：防护服，口罩，手套，鞋套，碘酒，灭菌棉签，采血管，采血针，注射器，15ml和50ml无菌管，玻片，记号笔，采样记录单，感染性材料专用垃圾袋。

操作：

采样时注意：最好采双份标本，一份用于检测，一份留做原始标本以供复检或复核。原始标本应首先直接涂片或培养，必要时可增菌后再试验。

1.血液标本：所有疑似病例，采取血液标本5-10ml（不加抗凝剂）。2.皮肤损害处标本：玻片直接在皮肤破损处压蘸，置于容器中；再用棉签采皮肤损害处渗出物，置无菌容器中（不加增菌肉汤）。

3.粪便与呕吐物标本：有消化道症状的采粪便或呕吐物标本，注意选取其中混有血液的部分，置无菌容器中。

4.痰与咽拭子标本：有呼吸道症状的收集痰液及咽拭子标本。5.脑脊液标本：表现脑膜刺激症状的病人，腰椎穿刺获取脑脊液。6.尸体标本的采取：可通过穿刺心脏获得血液或穿刺肝脏等实质性脏器获得组织标本。

7．有病死动物接触史可采病死动物标本或相关土壤等环境标本。

炭疽标本检测流程

1.涂片：

所有病人标本，都应首先立即涂片，革兰氏染色，镜检。发现大量两端平齐的革兰氏阳性大杆菌，即可定为临床诊断病例。

2.细菌分离培养：全部标本均应进行细菌分离培养。1）标本处理：

皮肤渗出物、血液或脑脊液，直接涂布营养琼脂平板。

土壤等有污染或陈旧的标本，均首先制成悬液（土壤等标本经自然沉淀除去粗大沉淀物），10000转／分钟离心5分钟，弃去大部分上清液，留少量液体与沉淀物混匀，沸水浴加热15分钟后，取适量涂布平板。

2）挑选可疑菌落

上述平板在37℃孵育12-24小时后，检查是否长出可疑的炭疽芽胞杆菌菌落。炭疽芽胞杆菌菌落的形态为：灰白色、不透明、中等大小，常不规则，表面呈毛玻璃样。

3）炭疽芽胞杆菌鉴定

将上述可疑菌落挑出，划线接种于平板之上，在划线区内一处滴一滴诊断用炭疽噬菌体，另一处贴一片青霉素纸片。37℃孵育8-24小时后，在滴噬菌体处有透明噬菌斑，青霉素纸片周围有明显的抑菌环，便可判定接种物为炭疽芽胞杆菌。在患者或尸体中分离获得炭疽芽胞杆菌，炭疽的诊断即可确立。

皮肤渗出物、血液、粪便或呕吐物、土壤直接涂片（革兰氏染色）细菌培养必要时做PCR见到革兰阳性大杆菌，可定为临床诊断未见到革兰阳性大杆菌，继续别的试验直接划平板直接划平板后的标本可增菌培养培养12~24h，选可疑菌落做青霉素敏感和噬菌体裂解试验两项均为阳性，可确诊为炭疽

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