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钝顶螺旋藻表达载体的构建及转化研究
摘要：
钝顶螺旋藻（Chlorellavulgaris）是一种常见的单细胞微藻，具有高
效的光合作用和高碳同化能力，因此被广泛应用于水质净化、生物燃料
制备和食品营养添加等领域。为了更好地利用该微藻的生产潜力，本研
究设计并构建了钝顶螺旋藻表达载体，并进行了转化实验。结果显示，
该载体能够成功地用于钝顶螺旋藻中的基因表达，并为该微藻的功能性
研究和应用奠定了基础。
关键词：钝顶螺旋藻；表达载体；转化；基因表达
引言：
钝顶螺旋藻是一种广泛存在于自然环境中的单细胞微藻，具有高效
的光合作用和高碳同化能力，能够吸收和利用二氧化碳和光能生长，因
此被广泛应用于水质净化、生物燃料制备和食品营养添加等领域。然而，
钝顶螺旋藻的功能性研究和应用受到制约，主要是由于缺乏适用于该微
藻的表达载体和转化技术。因此，本研究设计构建了钝顶螺旋藻表达载
体，并进行了转化实验，旨在为该微藻的功能性研究和应用提供支持。
材料和方法：
（1）构建载体
本研究选取常用的pUC18质粒作为骨架，根据钝顶螺旋藻的核酸序
列设计产生合成一个适用于该微藻的表达载体，命名为pUC18-CV。该载
体包含了起始子、终止子、载体DNA复制起始位点以及相应的选择标记
（Ampicillin-resistant）等。
（2）转化实验
采用电穿孔法（Electroporation）将pUC18-CV载体导入到钝顶螺旋
藻细胞中。首先，将钝顶螺旋藻细胞在光照下培养到对数生长期，收集
细胞后通过离心洗涤等步骤处理，得到约1×108个细胞/ml的菌液。然
后，将pUC18-CV载体加入到上述菌液中，之后通过电穿孔器进行转化，
转化参数为25μF、250V、2ms。最后，将转化液在适当培养基下接种
培养，并进行选择标记的筛选，得到含有目的基因的转基因菌株。
结果：
（1）构建的pUC18-CV载体经酶切和测序验证，其大小为3.5kb，
并成功地得到大量纯化。
（2）应用电穿孔法将pUC18-CV载体导入到钝顶螺旋藻中，经过选
标后获得了转基因菌株。
（3）利用荧光定量PCR技术验证钝顶螺旋藻细胞中的目的基因表
达，并确定其表达量。
讨论和结论：
本研究成功地构建了适用于钝顶螺旋藻的表达载体pUC18-CV，并利
用电穿孔法将该载体导入到该微藻中，获得了目的基因表达的转基因菌
株。这为钝顶螺旋藻的功能性研究和应用打开了新的途径。本研究还将
在未来进一步应用该载体，扩大其在钝顶螺旋藻的遗传工程研究和应用
中的作用。
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