饲料及饲料原料中呕吐毒素的快速筛查 胶体金快速定量法.docxVIP

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DB36

江西省地方标准

DB36/TXXXX-XXXX

饲料及饲料原料中呕吐毒素的快速筛查

胶体金快速定量法

Screeningofvomitoxininanimalfeedingstuffs

RapidQuantitativeMethodofColloidalGoldTechnique

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XXXX-XX-XX发布XXXX-

XXXX-XX-XX发布

江西省质量技术监督局

目次

TOC\o1-5\h\z前言II

范围1

2规范性引用文件1

3 原理1

4试剂和材料1

5仪器和设备2

6试样制备与保存2

7分析步骤2

8结果表述2

9 重复性3

附录A（资料性附录）胶体金免疫层析快速筛查组件试剂配制与技术要求4

目次

TOC\o1-5\h\z前言II

1 范围1

2规范性引用文件1

3 原理1

4试剂和材料1

5仪器和设备2

6试样制备与保存2

7分析步骤2

8结果表述2

9 重复性3

附录A（资料性附录）胶体金免疫层析快速筛查组件试剂配制与技术要求4

饲料及饲料原料中呕吐毒素的快速筛查胶体金快速定量法

1范围

本标准规定了用胶体金免疫层析法快速筛查测定饲料及饲料原料中呕吐毒素，为定量筛查方法。

本标准适用于玉米、小麦、大米、黄豆、豆粕、花生粕、DDGS等原料中及以玉米粉，小麦粉为主要基质的饲料成品中呕吐毒素的快速定量筛查。定量检测限为0.5mg/kg(ppm),检测范围为0.5mg/kg(ppm)—5.5mg/kg(ppm)o2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T20195动物饲料试样的制备

3原理

本方法应用了免疫层析原理。将氯金酸用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒，标记针对呕吐毒素的单克隆抗体，用喷金法固定于硝酸纤维素(NC)膜上，同时，在硝酸纤维素(NC)膜的显色区域有两个条带：质控带和检测带，质控条带上包被有呕吐毒素抗原，检测条带上包被有抗呕吐毒素单克隆抗体的二抗。试样提取液中的呕吐毒素与检测条中胶体金微粒上的单克隆抗体发生反应，形成氯金酸-抗体-抗原聚合物，此聚合物和剩余的氯金酸-抗体聚合物在侧流作用下移动，当到达质控线时，质控条带上包被的抗原与剩余的氯金酸-抗体聚合物结合发生呈色反应，颜色深浅与试样中呕吐毒素含量负相关，而氯金酸-抗体-抗原聚合物继续在侧流作用下移动，到达检测条带后，与检测条带上的二抗形成氯金酸-抗体-抗原二抗的聚合物，此条带的颜色同试样中的呕吐毒素含量正相关。由于试样中的呕吐毒素的含量一定，质控带的颜色和检测带的颜色此消彼长，呈相关性。等试验反应平衡后，用读数仪扫描检测条上显色区域内检测条带和质控条带颜色深浅,根据颜色深浅和读数仪内置曲线计算出试样中呕吐毒素含量。

4试剂和材料

除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/T6682二级水的规定。

胶体金免疫层析快速筛查组件(参见附录A)o

呕吐毒素残留检测试纸条。

样本提取液。0.1%的TritonX-100水溶液：量取1L实验用溶液，加入lgTritonX-100,混匀。商品试剂盒中提供此溶液。

氢氧化钠(NaOH1mol/L)：称取40g氢氧化钠，加水定容至1000ml,混匀。

DBXX/TXXX—XXXX

盐酸（HCL,1mol/L）：量取83.33mLp=1.18g/mL的盐酸，加水定容至1000mL,混匀。

5仪器和设备

5.1天平：感量0.01go

涡旋仪。

离心机：转速23000r/min。

微量移液器：20|iL~200a。

聚苯乙烯离心管：50mLo

读数仪：可测定并显示胶体金定量检测条的测定结果。

6试样制备与保存

试样制备

按GB/T20195要求制备试样。

试样保存

将试样于T0℃?-20℃下避光保存。

7分析步骤

试样提取

称取（1.00±0.01）g饲料样品至50mL聚苯乙烯离心管中，加入15mL样品提取缓冲液（2.1.3）,将瓶塞盖紧，涡动3min,室温3000r/min以上离心5min,取100瓜上清液待测。

非谷物基质，如果上清液pH值小于6或大于8,则需要用1mol/L氢氧化钠溶液（4.2）或1mol/L盐酸溶液（4.3）调节pH至7左右，然后取100此此溶液加入600也样本稀释液（4.1.2）,混