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均相化学发光免疫分析技术的研究进展及其在POCT中的应用前景分析

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李阳敏陈宇宁刘小花

【摘要】均相化学发光免疫分析技术由于灵敏度高、信号范围广、检测结果精准、无需洗涤等优点越来越多的受到关注。即时检测（point-of-caretesting，POCT）顺应现代医学需求，由于其检测快速、方便携带的优点而得到快速发展，然而检测结果准确率低、重复性差，成为POCT发展的巨大阻碍。本文就均相化学发光免疫分析技术的研究进展及其在POCT上的应用前景进行分析，旨在为该技术的临床应用提供参考依据。

【关键词】均相化学发光免疫分析技术;研究进展;POCT应用前景

R249????B??2095-6851（2020）06-132-02

1均相化学发光免疫分析技术的发展

上世纪90年代中期，美国科学家Ullman等人和美国德灵公司发现了光氧通道免疫分析技术（LuminescentOxygenChannelingImmunoassay，LOCI），揭示了单线态氧分子能量传递发光原理。1999年，美国PerkinElmer公司获得了开发LOCI技术的专有权并基于该技术建立了AlphaScreen/AlphaLISA（AmplifiedLuminescentProximityHomogeneousAssay），用于药物的研究与开发，此外也开发了多款免疫检测试剂盒，用于研究关键的生物学通路和多种疾病状态的生物标志物。2004年，我国在学习国外技术的基础上，对LOCI技术从试剂及设备进行了改进并开发了光激化学发光检测系统（Lightinitiatedchemiluminescenceassay，LiCA），广泛应用于多种抗原物质的检测。2018年，包德泉等人在LOCI技术的基础上做了进一步创新，在微球的包被材料及方法做了进一步优化，开发了可以提升单线态氧分子能量的均相化学发光免疫分析技术，其在灵敏度、检测范围、准确率、精密度上均表现出较好的优点。

2均相化学发光免疫分析技术原理及特点

均相化学发光免疫分析技术（homogeneouschemiluminescenceimmunoassay）是基于纳米微球的化学发光、以时间分辨荧光为检测模式的新型免疫学检测技术，以其独特的能量转移机制和化学发光原理可实现均相免清洗，快速，高灵敏和高通量检测。

3均相化学发光免疫分析技术的应用及其在POCT上的应用前景

3.1均相化学发光免疫分析技术的应用

均相化学发光免疫分析技术应用广泛，不仅可以在免疫、分子诊断领域对抗原、抗体、核苷酸等进行定量分析，在药物筛选、食品安全检测等方面也扮演着重要的角色。

3.1.1免疫診断领域

1996年，Ullman等人发现利用LOCI技术可以对临床上的重要分析物（环孢霉素、地高辛、雌二醇、叶酸、茶碱或TSH）等进行定量分析，并且样品用量少、反应时间短、灵敏度高、无需将结合物分离。随后，该技术便被用于多种生物标志物的检测。Poulsen、Gruson等人的研究表明AlphaScreen技术对预测心力衰竭的NT-proBNP、血浆胰岛素、纤连蛋白血管紧张素I等生物标志物含量的检测具有较好的检测结果，其检测时间短、样本用量少、检测范围广且检测结果精准。赵卫国等人也基于LICA技术原理开发出来的试剂对肌红蛋白、甲胎蛋白、心肌肌钙蛋白等的含量进行了检测，均表现出较好的灵敏度、准确度及精密度。目前，该技术已用于心肌标志物、肿瘤标志物、甲状腺激素、乙肝病毒抗原抗体、干扰素抗体、人胰岛素等的检测。此外，LOCI技术也被应用到了食品过敏反应的分子解析诊断中，Yan等人的研究表明LOCI技术为精确测定血清中的IgE含量的优良方法。

3.1.2分子诊断领域

1999年，Patel等人将LOCI技术与PCR扩增相结合，将寡脱氧核苷酸与乳胶微粒结合，通过连接探针与不同的DNA靶标杂交，从而实现了对DNA进行定量分析。SNP遍布于人类基因组中，SNP位点的发掘对于疾病的诊断和治疗具有重要意义，Beaudet等将LOCI技术与等位基因特异性扩增和等位基因特异性杂交结合后，建立了单核苷酸多态性分析平台，可对基因组DNA每个基因型进行精确定量，该技术灵敏度较高，大大减少了基因分型所需要的试剂及DNA样本量，为实现高通量基因分型检测提供了可行性。

3.1.3药物筛选

激酶是高通量药物筛选中最重要的靶点之一，激酶抑制剂对治疗炎症性疾病、免疫紊乱和癌症具有重要作用。Greg等人的研究表明AlphaScreen技术可以较好的用于激酶定量检测以及激酶抑制剂等药物的高通量筛选。LOCI技术在细胞生物学领域用于测定信号转导分子的含量，Niebel等人发现可以检测G蛋白开关的激活状态：定量测