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细菌的生理生化实验--第1页
1目的
1.1了解细菌鉴定中常用的生理生化试验反应原理
1.2掌握测定细菌生理生化反应的技术和方法
2原理
各种微生物在代谢类型上表现了很大的差异。由于细菌特有的单细胞
原核生物的特性，这种差异就表现的更加明显。不同细菌分解、利用
糖类、脂肪类和蛋白类物质的能力不同，所以其发酵的类型和产物也
不相同，也就是说，不同微生物具有不同的酶系统。即使在分子生物
学技术和手段不断发展的今天，细菌的生理生化反应在菌株的分类鉴
定中仍有很大作用。
3材料
3.1菌种
大肠埃希氏菌（Escherichiacoli）、产气肠杆菌
（Enterobacteraerogenes）、普通变形杆菌（Proteusvulgaris）、枯草
芽孢杆菌（Bacillussubtilis）的斜面菌种
3.2培养基
葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、
乳糖或蔗糖）
3.3试剂
40％NaOH溶液、肌酸、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、1.6%溴甲基
酚紫指示剂。
3.4器具
细菌的生理生化实验--第1页
细菌的生理生化实验--第2页
超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液管、杜氏小套管。
4流程
糖发酵试验→V-P试验→甲基红试验→吲哚试验
5步骤
(一)糖类发酵试验
1目的
了解不同细菌分解利用糖的能力及实验原理，并掌握其操作方法．
2原理
可根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌
种的依据。是否产酸，可在糖发酵培养基中加入指示剂溴甲酚紫（即
B.C.P指示剂，其pH在5.2以下呈黄色，pH在6.8以上呈紫色），
经培养后根据指示剂的颜色变化来判断。是否产气，可在发酵培养基
中放入倒置杜氏小管观察。
3材料
3.2菌种
大肠埃希氏菌（Escherichiacoli）、产气肠杆菌
（Enterobacteraerogenes）、普通变形杆菌（Proteusvulgaris）的斜面
菌种
3.３培养基
葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管
４流程
发酵液试管→标记→接种→培养→观察→记录
细菌的生理生化实验--第2页
细菌的生理生化实验--第3页
5步骤
5.1试管标记图9-1糖发酵产气
取分别装有葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管各Ａ不产气；
Ｂ产气
4支，每种糖发酵试管中均分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变
形菌和空白对照。
5.2接种培养
以无菌操作分别接种少量菌苔至以上各相应试管中，每种糖发酵培养
液的空白对照均不接菌。将装有培养液的杜氏小管倒置放入试管中
（图9-1），置37℃恒温箱中培养，分别在培养24h、48h、和72h
观察结果。
5.3观察记录
与对照管比较，若接种培养液保持原有颜色，其反应结果为阴性，表
明该菌不能利用该种糖，记录用“－”表示；如培养液呈黄色，反应结
果为阳性，表明该菌能分解该种糖产酸，记录用“＋”表示。培养液中
的杜氏小管内有气泡为阳性反应，表明该菌分解糖能产酸并产气，记
录用“＋”表示；如杜氏小管内没有气泡为阴性反应，记录用“－”表示。
（二）乙酰甲基甲醇试验(V．P试验)
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