微生物实验(污泥中细菌和抗Cu离子的细菌的总数测定_金属抗性细菌的分离、纯化、保存以及菌落形态观察).pdf

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环境工程微生物学

实验方案

实验题目：

污泥中细菌总数测定和抗Cu细菌的分离、纯化、保存以及

菌落形态观察

组长：XXX

组员：

ＸＸＸＸＸＸ

ＸＸＸＸＸＸ

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一、实验目的

1.学习污泥样品的采取方法和污泥样品细菌总数测定的方法。

2.了解平板菌落计数法的原则。

3.熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备工作。

4.了解配制微生物培养基的基本原理，掌握常规的配制、分装培养

基的方法。

5.学会各类物品的包装、配制和灭菌技术。

6.从污泥中分离、培养微生物，掌握常用的分离微生物的方法。

7.学会接种技术。

8.观察分离出来的几种细菌的个体形态及与其相应的菌落形态特

征。

二、实验原理

1、测细菌总数原理：微生物活体数量的测定方法，常用平板培

养计数法。它是通过将样品制成均匀的一系列不同稀释度的稀释液，

再取一定的稀释液接种，使其均匀分布于培养皿中特定的培养基内，

最后根据在平板上长出的菌落数计算出每克（或mL）样品中的活菌

数量。

2、培养基原理：培养基是微生物生长的基质，是按照微生物营养、

生长繁殖的需要，由碳、氢、氧、氮、磷、硫、钾、钠、钙、镁、铁

及微量元素和水，按一定的体积分数配制而成。调整合适的pH，经

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高温灭菌后以备培养微生物之用。本实验配制固体培养基，固体培养

基的成分与液体相同，仅在液体培养基中加入凝固剂使呈固态。通常

加入质量浓度15-20g∕L的琼脂为固体培养基。

3、灭菌原理:本次实验采取加压蒸汽灭菌法。加压蒸汽灭菌器是能耐

一定压力的密闭金属锅，加压灭菌的原理在于提高灭菌器内的蒸汽温

度来达到灭菌的目的。

4、分离纯化原理：本实验使用的平板表面涂布法，是把聚集在一起

的群体分散成能在培养基上长成单个菌落的分离方法。此法加样量不

宜太多，只能在0.5mL以下，培养时起初不能倒置，先正置一段时间

等水分蒸发后倒置。

5、微生物的接种原理：接种就是将一定量的微生物在无菌操作条件

下转移到另一无菌的并适合该菌生长繁殖所需的培养基中的过程。本

次实验采取斜面接种法，使用到的接种工具是接种环（一般为电炉

丝）。

6、菌落形态观察原理：由于微生物个体表面结构、分裂方式、运动

能力、生理特性及产生色素的能力等各不相同，因而个体及它们的群

体在固体培养基上生长状况各不一样。按照微生物在固体培养基上形

成的菌落特征，可从菌落的形状、大小、表面结构、边缘结构、菌丛

高度、颜色、透明度、气味、粘滞性、质地软硬、表面光滑粗糙等情

况，初步辨别是何种类型的微生物。

三、实验器材及试剂

微生物实验(污泥中细菌和抗Cu离子的细菌的总数测定_金属抗性细菌的分离、纯化、保存以及菌落