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微生物的分离鉴定与计数
一、微生物的分离与鉴定
1．分离微生物的原理与措施
(1)原理：自然环境中的微生物是混杂在一起的，因此分离获得纯培养物应首先采用的
方法是将单个的微生物与其他微生物分离，再给该微生物提供合适的营养和条件，使其生长
成为可见的群体。
(2)常用措施：
①接种过程中尽量使微生物分散开来，如平板划线法、稀释涂布平板法。
②运用选择培养基的作用特点，在培养基中添加某种特定的物质，抑制不需要的微生物
的生长，促进所需微生物的生长。
2．选择培养基四种常见制备方法或实例
-1-
【典例1】(2019·全国卷Ⅱ)物质W是一种含氮有机物，会污染土壤。W在培养基中
达到一定量时培养基表现为不透明。某研究小组欲从土壤中筛选出能降解W的细菌(目标菌)。
回答下列问题。
(1)要从土壤中分离目标菌，所用选择培养基中的氮源应该是________。
(2)在从土壤中分离目标菌的过程中，发现培养基上甲、乙两种细菌都能生长并形成菌
落(如图所示)。如果要得到目标菌，应该选择________菌落进一步纯化，选择的依据是
_______________________
_____________________________________________________。
(3)土壤中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源。若要设计实验进一步确定甲、
乙菌能否利用空气中的氮气作为氮源，请简要写出实验思路、预期结果和结论，即
__________________________。
(4)该小组将人工合成的一段DNA转入大肠杆菌，使大肠杆菌产生能降解W的酶(酶E)。
为了比较酶E与天然酶降解W能力的差异，该小组拟进行如下实验，请完善相关内容。
①在含有一定浓度W的固体培养基上，A处滴加含有酶E的缓冲液，B处滴加含有相同
浓度天然酶的缓冲液，C处滴加________，三处滴加量相同。
②一段时间后，测量透明圈的直径。若C处没有出现透明圈，说明
______________________________________________________
_____________________________________________________；
若A、B处形成的透明圈直径大小相近，说明________________
_____________________________________________________。
解析：(1)该研究小组的目标菌是能够降解物质W的细菌，而物质W是一种含氮有机物，
故可作筛选培养基中的氮源。(2)研究小组的目标菌，是能够降解物质W的细菌，培养基中乙
菌落的周围出现透明圈，说明乙菌落能够降解物质W，故乙菌落为该小组的目标细菌。(3)目
标菌能够利用空气中的氮气作为氮源，故选用的筛选培养基不添加氮源，能够在无氮源的培
养基上生存的细菌便是目的细菌，故实验操作为：将甲、乙菌分别接种在无氮源培养基上，
-2-
若细菌能生长，则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源。(4)①C处作为空白对照，要排
除作为溶剂的缓冲液对实验可能造成的影响，故需要在C处滴加缓冲液，且保持滴加量相同；
②培养基中的透明圈表示物质W被降解的情况，若C处不出现透明圈，则说明缓冲液不能降
解物质W；若A、B处形成的透明圈直径大小相近，说明物质W被降解的程度相近，即酶E与
天然酶降解物质W的能力相近。
答案：(1)W
(2)乙乙菌落周围出现透明圈，说明乙菌能降解W
(3)将甲、乙菌分别接种在无氮源培养基上，若细菌能生长，则说明该细菌能利用空气
中的氮气作为氮源
(4)①缓冲液②缓冲液不能降解W酶E与天然酶降解W的能力相近
选择培养基的设计方法
(1
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