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谷胱甘肽亲和层析介质制备及其对蛋白的纯化

谷胱甘肽（glutathione,GSH）是一种广泛存在于生物体内的小分子

多肽，由谷氨酰胱氨酸（glutamicacid,Gly）和甘氨酰胱氨酸（glycine,

Gly）通过肽键连接而成。作为一种重要的还原剂和抗氧化剂，谷胱甘肽

在维持细胞内氧化还原平衡、解毒和细胞信号传导等生理过程中发挥着

重要的作用。因此，研究谷胱甘肽和与其相互作用的蛋白质对于了解生

物体内的氧化还原反应机制以及相关疾病的发生与发展具有重要意义。

为了研究谷胱甘肽与其他蛋白质的相互作用，需要纯化目标蛋白并

进行结构和功能的分析。其中一种常用的方法是利用谷胱甘肽亲和层析

（glutathioneaffinitychromatography）。谷胱甘肽亲和层析是一种专门

用于纯化谷胱甘肽结合蛋白的分离技术，它基于谷胱甘肽和谷胱甘肽-S-

转移酶（glutathione-S-transferase,GST）的强烈亲和力。

制备谷胱甘肽亲和层析介质的关键步骤是将谷胱甘肽与固定在含有

亲和剂（如氯化亚砜活化媒介）的石蜡烷胶微球上的GST反应。该反应

产生的谷胱甘肽-GST共价结合物将被固定在石蜡烷胶微球表面，形成谷

胱甘肽亲和层析介质。制备的过程一般涉及以下几个步骤：

1.准备活化石蜡烷胶微球：活性石蜡烷胶微珠一般具有一定的含水

量，需要先通过脱水处理，然后和活化剂一起活化。活化剂一般选择氯

化亚砜，它能与谷胱甘肽反应生成亲和剂。

2.联合反应：将活化石蜡烷胶微波浸入含有谷胱甘肽和GST的缓冲

溶液中，在一定温度下进行联合反应。反应时间和温度取决于谷胱甘肽

和GST的亲和条件。

3.洗脱：用含有高浓度还原剂的缓冲液洗脱非特异结合的蛋白质，

然后用缓冲溶液洗脱具有特异结合的谷胱甘肽结合蛋白。

谷胱甘肽亲和层析介质的制备需要注意以下几点：

1.石蜡烷胶微球的选择：石蜡烷胶微球应具备良好的亲和性和机械

强度，以确保纯化的效果和工艺的稳定性。

2.反应条件的优化：反应条件包括反应时间、温度、谷胱甘肽和

GST的比例等，需要通过实验优化以得到最佳纯化效果。

利用谷胱甘肽亲和层析介质进行蛋白质纯化的优点包括：

1.高纯度：谷胱甘肽与GST之间的结合具有很强的特异性，能够高

效地纯化目标蛋白质。

2.高亲和力：谷胱甘肽和GST之间的结合亲和力很强，使得目标蛋

白质可以在非变性的条件下纯化。

3.可逆性：目标蛋白质可以通过加入高浓度还原剂来解离谷胱甘肽-

GST结合物，实现脱附和回收。

总之，谷胱甘肽亲和层析介质的制备及其对蛋白的纯化是一种有效

的分离技术，可用于研究谷胱甘肽与其他蛋白质的相互作用机制。随着

生物技术的不断发展和改进，谷胱甘肽亲和层析介质在蛋白纯化和药物

研发等领域的应用前景将更为广泛。