猪IL-5基因克隆、表达及多克隆抗体的制备.docx

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2024-09-14 发布于河北
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猪IL-5基因克隆、表达及多克隆抗体的制备

摘要：【目的】通过对猪白介素5（IL-5）基因进行克隆、原核表达，以制备多克隆抗体。【方法】TRIzol法提取猪组织总RNA并反转录为cDNA，RT-PCR扩增猪源IL-5基因，连接至克隆载体pMDTM-19T进行基因测序鉴定后，亚克隆到表达载体pET-32a构建重组质粒，转化到大肠杆菌DH5α菌株中，利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）进行诱导表达，重组蛋白纯化复性后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，Westernblot和ELISA方法检测多克隆抗体特异性和效价。【结果】成功克隆猪源IL-5基因；酶切鉴定结果