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纳豆激酶基因转化生菜的初步研究的任务书
任务书：
一、背景
纳豆激酶是一种能够水解纳豆多糖的酶，被广泛应用于纳豆的生产过程
中。近年来，随着对其功能的深入研究，纳豆激酶也被发现具有很多健
康功效，如改善血液循环、防止血栓形成等。因此，将纳豆激酶基因导
入其他植物，实现在植物中产生纳豆激酶，为纳豆激酶的应用拓宽了新
的途径。
二、目的
本研究的主要目的是将纳豆激酶基因转化到生菜中，让生菜能够自主合
成纳豆激酶。通过分析转化后的生菜中纳豆激酶的表达情况，探究是否
可以利用生菜作为纳豆激酶的一种生产途径，为纳豆激酶的大规模生
提供新的思路。
三、研究内容
1、构建纳豆激酶基因的植物表达载体。
2、利用农杆菌介导法将纳豆激酶基因导入生菜中，筛选转化阳性株。
3、对筛选出的转化阳性株进行PCR检测，并进行纳豆激酶的表达情况分
析。
4、确定生菜中纳豆激酶的活性，分析其在纳豆激酶功能类产品中的应用
前景。
四、研究计划
1、前期调查：搜集纳豆激酶基因的相关文献，摸清生菜转化的可行性。
2、基因克隆：从纳豆中提取RNA，利用RT-PCR方法扩增纳豆激酶基因。
3、构建载体：将纳豆激酶基因克隆入植物表达载体pCAMBIA1301中。
4、植物转化：将构建好的植物表达载体通过农杆菌介导法，在生菜中导
入纳豆激酶基因。
5、筛选转化生菜：利用抗生素筛选转化阳性株，同时进行GUS染色实验
鉴定。
6、PCR检测：将筛选出来的转化阳性株进行PCR检测，验证纳豆激酶基
因是否被成功导入生菜中。
7、表达分析：通过Westernblot法等方法分析生菜中纳豆激酶的表达情
况。
8、活性测定：采用适当方法测定生菜中纳豆激酶的活性，探究其应用前
景。
五、预期结果
1、成功构建纳豆激酶基因的植物表达载体。
2、成功将纳豆激酶基因导入生菜中，并筛选出转化阳性株。
3、PCR检测结果能验证纳豆激酶基因的导入是否成功，Westernblot法
分析能够探究导入的基因是否成功表达。
4、成功分离出生菜中的纳豆激酶，并测定其活性。
六、参考文献
1.YamashiroT,MoritaO,YunokiR,etal.Nattokinase,profibrinolytic
enzyme,effectivelyshrinksthenasalpolyptissueanddecreases
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2.KumeH,OkazakiM,IizukaM,etal.Novelfibrinolyticenzyme
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3.NakamuraK,TakahashiY,YamadaT.Nattokinaseasasuperior
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