酶的分离工程 (2).ppt

*********************************************************淋洗（去除残留在介质中的杂质）盐浓度pH表面活性剂（0.1-0.5%)淋洗体积：根据流出液杂蛋白浓度而定防止产物丢失又要除去杂质第128页,共141页，星期六，2024年，5月*洗脱方法按操作方式a恒定洗脱b分步洗脱c梯度洗脱按洗脱机理专一性洗脱、非专一性洗脱添加剂：乙二醇,NaCNS、脲素、盐酸胍洗脱体积：5倍床体积第129页,共141页，星期六，2024年，5月*恒定洗脱第130页,共141页，星期六，2024年，5月*分步洗脱第131页,共141页，星期六，2024年，5月*(c)梯度洗脱第132页,共141页，星期六，2024年，5月*清洗与再生弱酸：HAC碱：氨水促溶剂：1-3MKCNS、6-8M尿素、6M盐酸胍极性溶剂：20%乙醇表面活性剂：吐温-80缓冲液平衡第133页,共141页，星期六，2024年，5月*第134页,共141页，星期六，2024年，5月*第135页,共141页，星期六，2024年，5月*第136页,共141页，星期六，2024年，5月*思考题1理解概念：解离常数，分离因素，阻滞因子，理论塔板高度，洗脱体积，分辨率。2常用的层析介质有哪些？各适用于何种状况下的分离？3亲和层析的机理是什么？4层析柱洗脱方式有几种？各适用于何种情况？第137页,共141页，星期六，2024年，5月*第138页,共141页，星期六，2024年，5月*第139页,共141页，星期六，2024年，5月*第140页,共141页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第141页,共141页，星期六，2024年，5月*************************************吸附剂的选择：要求吸附剂（支持剂）的粒度更细，一般应小于250目，并要求粒度均匀。用于薄层层析的吸附剂或预制薄层一般活度不宜过高，以Ⅱ～Ⅲ级为宜。展开距离则随薄层的粒度粗细而定，薄层粒度越细，展开距离相应缩短，一般不超过10厘米，否则可引起色谱扩散影响分离效果。第96页,共141页，星期六，2024年，5月*展开剂的选择：当吸附剂活度为一定值时（如Ⅱ或Ⅲ级），对多组分的样品能否获得满意的分离，决定于展开剂的选择。中草药化学成分在脂溶性成分中，大致可按其极性不同而分为无极性、弱极性、中极性与强极性。但在实际工作中，经常需要利用溶剂的极性大小，对展开剂的极性予以调整。

第97页,共141页，星期六，2024年，5月*薄层层析的基本操作：①.薄层板的制备②.样品的预处理③.点样、展层与显色④.影响Rf的主要因素⑤.薄层色谱法的应用第98页,共141页，星期六，2024年，5月*常用层析介质氧化铝：它是一种多孔性、高分散度固体（1）有很大的比表面积，其微孔表面具有吸附性能。（2）分子式Al2O3简单，空间形态复杂，8种以上的形态（3）同一形态宏观结构性质如密度、孔隙率、孔径分布、比表面积等存在差异（4）吸附量与含水量关系很大制备：由氢氧化铝加热脱水得到的。第99页,共141页，星期六，2024年，5月*吸附基团：铝离子种类：碱性：由氢氧化铝高温脱水，用于碱性稳定的溶质酸性：碱性氧化铝经盐酸洗涤，用于在酸性稳定的溶质中性：碱性氧化铝经水洗后活化制得应用：有机溶剂中分离天然成分第100页,共141页，星期六，2024年，5月*硅胶硅胶是由多聚硅酸经分子间脱水而形成的一种多孔性物质（1）化学组成SiO2.XH20，（2）属于无定形结构，基本结构质点为Si—O四面体，相互堆积形成硅胶的骨架。质点间的空间即为硅胶的孔隙。（3）硅胶中的水以羟基的形式和硅原子相连而覆盖于硅胶表面。第101页,共141页，星期六，2024年，5月*硅胶的分类（常以孔径大小来分），(1)特细孔硅胶(0.8nm以下)(2)细孔硅胶（1.5—2.0nm)(3)中孔硅胶(4.0一5.0nm)(4)粗孔硅胶(10.nm以上)应用：吸附层析剂与分配层析剂优先吸附极性分子及不饱和的碳氢化合物，用于天然产物分离，可用在水溶液中或有