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枯草芽孢杆菌的分离及筛选教学文案--第1页

枯草芽孢杆菌的分离

及筛选

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微生物设计性实验

枯草芽孢杆菌的分离及筛选

1实验目的

掌握枯草芽孢杆菌的分离筛选的基本原理，熟练掌握无菌接种技术、微生

物分离筛选技术和微生物形态观察技术。了解枯草芽孢杆菌的分布、营养、生

长等特点，以及它所具有的产淀粉酶的功能。根据这些特点进行分离和筛选，

从而得到纯菌株。

2实验原理

枯草芽孢杆菌属革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱

状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污

白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。需氧菌。有的菌株是α-

淀粉酶和中性蛋白酶的重要生产菌；有的菌株具有强烈降解核苷酸的酶系。广

泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。选择含淀粉丰

富的土壤为最佳，80度的水浴处理样品1小时，目的是杀死微生物营养体，残

留芽胞。利用稀释涂步法，在淀粉的培养基培养，培养1-3天后，观察。然

后，进行初筛与纯化，鉴定参照《伯杰氏细菌手册》鉴定或者利用显微镜进行

革兰氏染色，确认是否为枯草芽孢杆菌。再复筛，测定其淀粉酶活，最后确定

菌株。

3实验材料

3.1选择培养基

本次实验进行产淀粉酶的枯草芽孢杆菌的筛选，所以应选淀粉培养基。

配方：

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牛肉膏5.0g

蛋白胨10.0g

氯化钠5.0g

可溶性淀粉10.0g

琼脂20g

蒸馏水1000ml

调整pH至7.2

配置时应先把淀粉用少量蒸馏水调成糊状，再加入到融化好的培养基中。

3.2溶液或试剂

牛肉膏1.25g

蛋白胨2.5g

氯化钠1.25g

可溶性淀粉2.5g

琼脂5g

碘11克，碘原液2毫升，碘化钾42克，可溶性淀粉2克，磷酸氢二钠

45.23克，柠檬酸8.068克，氯化钴25克，重铬酸钾3.34克，100毫升

0.01NHCL。

3.4仪器或其他用品

平板培养皿10个、试管15支、三角瓶2个、烧杯3个、称量纸、高压蒸

汽灭菌锅、干燥箱、恒温培养箱、超净工作台、无菌涂布器、电热恒温水浴、

500ml量筒、显微镜、无菌吸管、无菌培养皿、无菌刻度吸管、酒精灯、记号

笔、火柴、试管架、接种钩、滴管等。

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4实验流程

倒平板→制备梯度稀释液→涂布→培养→初筛→复筛→纯化→保存