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嗅神经母细胞瘤的基因组特征和肿瘤免疫微环境研究

【摘要】目的探讨嗅神经母细胞瘤（olfactoryneuroblastoma，ONB）基因

组特征和肿瘤免疫微环境特点。方法对2018年5月至2022年10月在北京同

仁医院诊断的19例ONB患者，根据Hyams分级系统分为低级别和高级别两组，7

例为低级别，12例为高级别，将ONB患者组织标本进行全外显子测序和多重免

疫荧光分析。结果18例ONB鉴定出929个非同义突变，突变频率最高的癌症相

关基因是CTNNB1（3/19）和ZNRF3（3/19），突变频率最高的通路是Wnt和RAS

通路。中位肿瘤突变负荷（TMB）0.45个突变/Mb（范围为0~3.25），中位肿瘤

新抗原负荷（TNB）9.39个新抗原/Mb（范围为0~38.30），中位等位基因突变的

肿瘤异质性（MATH）得分为16.95（范围为3.05~117.47）。多重免疫荧光结果

显示1例表达细胞程序性死亡配体1（PD-L1；综合阳性评分1），CD8+肿瘤浸

润淋巴细胞（TIL）在肿瘤区域浸润的百分比中位数为1.08%。低级别组和高级

别组在突变基因、突变通路、TMB、TNB、MATH、PD-L1和CD8+TIL表达差异无

统计学意义（P0.05），但CD68+巨噬细胞在低级别组肿瘤区域和总区域均显著

多于高级别组（P0.05），M1型巨噬细胞占CD68+巨噬细胞80.52%。结论CTNN

B1和ZNRF3是ONB高频突变基因；PD-L1低表达和CD8+TIL数量低提示ONB可

能对免疫治疗不敏感；M1型巨噬细胞在低级别ONB表达显著高于高级别，提示

可能参与ONB进展。

【关键词】头颈部肿瘤；遗传学；免疫学

嗅神经母细胞瘤（olfactoryneuroblastoma，ONB）是一种少见的鼻腔鼻

窦恶性肿瘤，起源于嗅神经上皮［1］，目前的治疗方法以手术切除为主，根据

需要结合放疗和/或化疗［2］，ONB复发常见，上述多模式非靶向治疗对于复发

性ONB的临床疗效有限［3］。由于ONB病例比较少见，基因组数据缺乏，限制

了诊疗水平的提高，另外，目前免疫治疗已经广泛应用于多种肿瘤的治疗，程序

性死亡受体1（PD-1）及其配体（PD-L1）抑制剂用于复发/转移性头颈部鳞状

细胞癌的治疗取得了突破性成就［4］，然而，PD1/PD-L1在ONB中的作用机制

尚不清楚。在本研究中对19例ONB样本进行了全外显子测序和多重免疫荧光（M

IF）分析，并比较了低级别组和高级别组基因差异和免疫细胞表达差异，有助于

丰富ONB基因库和为ONB的免疫治疗提供依据。

资料与方法

1.病例资料：收集2018年5月至2022年10月在北京同仁医院诊断的19

例ONB患者，由经验丰富的2位病理医师进行独立评估，确认病理诊断和病理分

级，确保肿瘤含量≥20%。病理分级按照Hyams分级系统，该分级是基于评估小

叶结构、核分裂象、核多形性、神经原纤维基质、坏死、钙化、菊型团的四级分

级标准，将ONB分为低级别组（HyamsⅠ和Ⅱ）和高级别组（HyamsⅢ和Ⅳ）

［5］。肿瘤分期根据Kadish分期系统：肿瘤局限于鼻腔为KadishA期、延伸

到鼻窦为KadishB期、肿瘤浸润范围超出鼻腔鼻窦为KadishC期。本研究经

北京同仁医院伦理委员会批准（批号：MR-11-23-000050）。

2.方法：（1）DNA提取与全外显子组测序分析：使用QIAampDNA石蜡包埋

组织（FFEP）试剂盒（德国Qiagen公司）从FFEP标本中提取DNA。目前使用F

FPE进行全外显子测序的技术比较成熟［6］，在ONB中的研究也有相关报道［7

-9］。使用Qubit3.0荧光仪（美国ThermoFisherScientific公司）评估

分离DNA的量和质量。使用TwistHumanCoreExomeKit（美国TwistBiosci

ence公司）按照制造商的方法进行文库构建。在IlluminaNovaSeq6000平台（美

国Illumina公司）上进行150bp的双端测序。测序后的序列首先使用fastp过

滤［10］，然后使用Burrows-WheelerAligner与参考基因组（hg19）比对［1

1］。单核苷酸变异、小插入和缺失通过Mutect2和TNseq进行鉴定［12］