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食品分析与检验重要实验讲解--第1页

实验一：食品中亚硝酸盐的测定

一、实验目的

1.掌握盐酸萘乙二胺比色法测定亚硝酸盐的原理

2.掌握分光光度计的使用、标准曲线的绘制及计算方法

3.了解分光光度计的构造

二、实验原理

样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重

氮化，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，其最大吸收波长为538nm，可测定

吸光度并与标准比较定量。

三、仪器与试剂

1.仪器

（1）分光光度计

（2）小型胶肉机

（3）恒温水浴锅

2．试剂

（1）亚铁氰化钾溶液(106g/L)：称取106.0g亚铁氰化钾，用水溶解，并稀释至1000mL。

（2）乙酸锌溶液(220g/L)：称取220.0g乙酸锌，先加30mL冰醋酸溶解，用水稀释至

1000mL。

（3）饱和硼砂溶液(50g/L)：称取5.0g硼酸钠，溶于100mL热水中，冷却后备用。

（4）对氨基苯磺酸溶液（4g/L）：称取0.4ｇ对氨基苯磺酸，溶于100mL20%（V/V）

盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。

（5）盐酸萘乙二胺溶液（2g/L）：称取0.2g盐酸萘乙二胺，溶于100mL水中,混匀后，

置棕色瓶中，避光保存。

（6）亚硝酸钠标准溶液（200μg/mL）：准确称取0.1000ｇ于110℃～120℃干燥恒重

的亚硝酸钠，加水溶解移入500mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。

（7）亚硝酸钠标准使用液（5.0μg/mL）：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00mL，

置于200mL容量瓶中，加水稀释至刻度。

四、实验步骤

1.提取

称取2.50g经绞碎混匀的样品，于50mL烧杯中，加硼砂饱和溶液12.5mL饱和硼砂

溶液，搅拌均匀，以70℃左右的水约300mL将试样洗入500mL容量瓶中，于沸水浴

中加热15min，取出置冷水浴中冷却，并放置至室温。

2.提取液净化

在振荡上述提取液时加入5mL亚铁氰化钾溶液,摇匀,再加入5mL乙酸锌溶

液，以沉淀蛋白质。加水至刻度,摇匀,放置30min,除去上层脂肪,上清液用滤纸过

滤,弃去初滤液30mL，滤液备用。

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3.亚硝酸盐的测定与数据记录

0123456789

标准使用液体积mL0.000.200.400.600.801.001.502.00

样品质量g/

样品提取液体积mL/

对氨基苯磺酸溶液2mL(混匀,静置3-5min)

盐酸萘乙二胺溶液1mL

水至刻度，混匀，静置15min

比色测吸光度2cm比色皿，538nm，0管调零

吸光度

五、结果计算

1.绘制标准曲线

以亚硝酸钠量（μg）为横坐标，与其对应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线