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第六章第十节抗生素类药物的分析

学习要点1、掌握β－内酰胺类抗生素（青霉素、头孢菌素）的鉴别反应及含量测定的原理、方法。2、掌握氨基糖苷类抗生素（链霉素、庆大霉素）的鉴别试验及含量测定的原理、方法。3、熟悉四环素类（四环素、土霉素）、氯霉素类（氯霉素），大环内酯类（红霉素、罗红霉素、麦迪霉素）抗生素的鉴别试验及含量测定方法。4、了解磷霉素钠、林可霉素的鉴别反应及含量测定方法。5、了解青霉素、链霉素、庆大霉素、四环素、红霉素等药物中特殊杂质的检查方法。

第一节概述抗生素：指在低微浓度下可对某些生物的生命活动有特异性抑制作用的化学物质，是目前临床抗感染治疗的重要药物。抗生素的活性：以效价单位来表示，即指每毫升或每毫克中含有某种抗生素的有效成分的多少。

一般常规检查项目：1、鉴别试验2、异常毒性试验3、无菌试验4、热原试验5、水分测定6、溶液澄明度检查7、溶液酸碱度8、降压试验9、含量测定或效价测定抗生素的效价测定方法主要分为微生物检定法和化学或物理化学测定法。a、微生物检定法b、化学或物理化学测定法

第二节?-内酰胺类抗生素的分析一、结构：A：?-内酰胺环B：氢化噻唑环A：?-内酰胺环B：氢化噻嗪环侧链：侧链：

二、性质：1、强酸性青霉素类和头孢菌素类药物其分子中的游离羧基具有相当强的酸性能与无机碱或某些有机碱作用成盐，如青霉素钠（钾）、氨苄西林钠、磺苄西林钠、普鲁卡因青霉素等。青霉素的碱金属盐水溶液遇酸则析出游离体的白色沉淀。2、旋光性青霉素族分子中含有三个手性碳原子，头孢菌素族分子中含有两个手性碳原子，故都具有旋光性。

3、紫外吸收青霉素族分子中的母核部分无紫外吸收，但其侧链部分由于具有苯环共轭系统，则有紫外吸收特征。头孢菌素由于母核部分具有O=C-N-C=C结构，故有紫外吸收。4、β-内酰胺环的不稳定性干燥纯净的青霉素盐很稳定。在室温可保存3年以上。青霉素的水溶液很不稳定，微量的水分易引起水解。

β-内酰胺环是青霉素族结构中最不稳定的部分，如与酸、碱、青霉素酶、羟胺及某些金属离子（铜、铅、汞、银）等作用时，易发生水解和分子重排，导致β-内酰胺环的破坏而失去抗菌活性。青霉素的β-内酰胺环破坏和发生分子重排后，产生一系列的降解产物，如青霉噻唑酸、青霉酸、青霉醛、青霉胺、青霉烯酸等。

三、鉴别试验1、钾、钠盐的火焰反应青霉素族、头孢菌素族药物多是制成钾盐或钠盐供临床使用，因而可利用其火焰反应进行鉴别。2、呈色反应a.羟肟酸铁反应b.青霉素及头孢菌素在碱性中与羟胺作用，β-内酰胺c.环破裂生成羟肟酸，在稀酸中与高铁离子呈色。

b．硫酸-硝酸呈色反应头孢菌素能与硫酸-硝酸反应后呈色。此反应可区别某些头孢菌素族抗生素。c．茚三酮反应某些具有α-氨基的本类药物，如氨苄西林遇茚三酮显蓝紫色。d．与斐林试剂反应本类药物具有类似肽键（-CONH-）结构，可产生双缩脲反应，开环分解，使碱性酒石酸铜盐还原紫色。

e．变色酸-硫酸呈色反应阿莫西林加变色酸-硫酸试剂混合后，因分解出甲醛与变色酸缩合而呈深褐色。f．与重氮苯磺酸呈色反应头孢菌素族7位侧链含有-C6H5-OH基团时，能与重氮苯磺酸试液产生偶合反应，显橙黄色。g．与铜盐呈色头孢氨苄加醋酸、硫酸铜、氢氧化钠试液后，生成铜配位盐，显橄榄绿色。此反应可区别于其他头孢菌素族抗生素。

3、沉淀反应：a．在稀盐酸中生成白色沉淀青霉素钾和青霉素钠加水溶解后，加稀盐酸2滴，即析出难溶于水的游离体白色沉淀。此沉淀能在乙醇、醋酸戊酯、氯仿、乙醚或过量的盐酸中成盐。b．有机胺盐的特殊反应（i）重氮化-偶合反应：普鲁卡因青霉素水溶液酸化后，生成具有芳香第一胺的普鲁卡因，可发生重氮化-偶合反应，生成红色的偶氮化合物沉淀。

(ii)三硝基苯酚反应：苄星青霉素经氢氧化钠碱化后，用乙醚提取，蒸去乙醚后残渣含有二苄基乙二胺，加稀乙醇使残渣溶解，加三硝基苯酚的饱和溶液，加热后放冷，即析出二苄基乙二胺苦味酸盐结晶。

4、光谱法a．紫外分光光度法（i）最大吸收波长鉴别法（ii）水解产物的最大吸收波长鉴别法：先将供试品在一定条件下水解，测定水解产物的最大吸收波长。如苯唑西林钠的鉴别是利用苯唑西林钠在弱酸性条件下经微量Cu2+的催化，β-内酰胺环发生分子重排，产生的苯唑青霉烯酸在339nm波长处有最大吸收。

b．红外光谱法红外吸收光谱反映了分子的结构特征。c．核磁共振光谱核磁共振光谱是利用构成分子的原子核本身性质的差异进行分析的，而不是利用核外电子性质的差异进行的，因而专属性很高。

5、色谱法：a.TLCb.HPLC

四、杂质检查：1、青霉素中高分子的检查青霉素在临床使用的几十年中，常发生过敏反应，导致某些患者严重休克，甚至死亡。国外文献报道，引起青霉素过敏反应的过敏原是青霉噻唑蛋白（penicilloylpro