《流式细胞技术》课件.pptVIP

完整版ppt*完整版ppt*IntracellularCytokine-Protocol完整版ppt*完整版ppt*SORTING（细胞分选）完整版ppt*DIMERXantigenspecificTcellassaymethodformonitoringcellularresponse完整版ppt*CBA(CytometricBeadArray)完整版ppt*TraditionalAnalysis--Percentpositive完整版ppt*DeterminationoftheCD4PEABConlymphocytes110100100010000LinearFluorescenceinFL2102103104cellandbeadneglymphFL2;(49,000ABC)MoleculesPEperBead105完整版ppt*第三节流式细胞术的临床应用白血病免疫分型HLA-B27:强直性脊柱炎淋巴细胞亚群造血干细胞计数：造血干细胞移植网织红细胞PNH诊断（CD55.CD59）血小板活化试验完整版ppt*流式细胞白血病免疫分型完整版ppt*流式细胞的免疫分型是白血病分型的重要指标FAB标准,形态学和免疫表型结合适合于白血病的分型诊断,但不适合用于确诊是不是白血病。Minimalresidualdiseases(MRD)完整版ppt*FCM应用1、细胞增殖周期测定和DNA倍体分析2、凋亡检测3、免疫功能的检测4、血液学应用5、HLA-B27的检测：用于诊断强直性脊柱炎。6.其他：溶液中细胞因子的测量。7、细胞分选完整版ppt*细胞增殖周期测定和DNA倍体分析1）细胞增殖周期：分为G0、G1、S、G2.M期。S期是DNA合成期，在S期内，DNA进行复制，使细胞的DNA含量由2倍体（2C46条染色体）变为4倍体（4C）。G1和G2期为DNA合成前、后间期，此期无DNA的合成，但RNA和蛋白质进行合成。M期为有丝分裂期，在此期一个细胞分裂为2个细胞。细胞内的92条染色体分裂成2组46条染色体，使每个细胞内具有46条染色体。在M期分裂成两个子细胞之前，G2和M期细胞的DNA含量均为恒定的4C。M期以后部分细胞进入G1期，继续进行增殖，部分细胞进入G0期，即静止期，不再继续增殖。因此，FCM分析一个群体细胞峰DNA倍体与细胞周期时，将DNA含量直方图分为三部分，即G0/G1,S,G2/M期三个细胞峰。G0/G1和G2/M细胞峰DNA的含量成正态分布，S期细胞峰则是一个加宽的正态分布。完整版ppt*2）利用DNA的荧光染料,如PI（Propidiumiodide碘化丙啶）,与细胞内的DNA结合,可反映细胞内DNA含量。采用DNA直方图显示。具有2CDNA含量细胞为G0/G1期细胞,4CDNA含量细胞为G2/M期细胞,DNA含量介于两者之间的细胞为S期细胞。完整版ppt*3）DNA倍体:主要比较G0/G1期细胞DNA含量的变化。用DNA指数（DI）表示。DNA指数=测量样本G0/G1期DNA含量/正常人淋巴细胞G0/G1期DNA含量以正常人淋巴细胞作为对照。正常细胞DNA指数为1.00，DNA指数＞1，为超2倍体，＜1为亚2倍体，两者可统称为非整倍体。非整倍体细胞中肿瘤的特异性标志，实体肿瘤中出现频率较高。完整版ppt*完整版ppt*完整版ppt*完整版ppt*第四节凋亡检测1）FCM-DNA检测（DNA亚G1峰的检测）:利用PI染色，检测具有亚G1期DNA含量的细胞比例，代表凋亡细胞数。其原理为在凋亡过程中，细胞内核酸酶的释放，将DNA降解，分解成小的片段，在标本制备中的固定处理时，细胞膜的完整性被破坏，使细胞内降解的DNA片段从细胞内流出，造成总体DNA含量减少，成为亚2倍体。注:检测的凋亡细胞数代表晚期的凋亡细胞比例，且易受标本中的死细胞和碎片的干扰，影响结果的准确性。可参看文章:/content/cell/20040914791.htm/content/cell/20040914792.htm完整版ppt*2）DNA链损伤“TUNEL”法3）Annexin-V-FITC/PI双染法4）线粒体细胞膜电位的检测5）凋亡相关基因的检测——免疫标记法检测基因完整版ppt*完整版ppt*完整版ppt*第五节免疫功能的检测（1）利用多参数流式细胞术，对PB