高效液相色谱法课件课件.pptVIP

?（3）应用有机酸、有机碱特别是强酸强碱的分析，如羧酸、磺酸、胺类、酚类、药物、染料等4.离子色谱法(1)分离机理试样中的离子与离子交换树脂上的离子发生反应：阳离子交换：树脂—SO3-H++M+=树脂—SO3-M++H+阴离子交换：树脂—NR3+Cl-+X-=树脂—NR3+X-+Cl-不同的离子与树脂离子的交换能力（亲和能力）不同，亲和力越大，离子越难洗脱，从而得以分离。离子交换色谱与离子色谱的分离原理一样离子色谱最大的改进是解决了微量组分的检测问题双柱抑制型：在分离柱和检测器之间加一个化学抑制器，其作用有二，一是降低淋洗液的背景电导，二是增加被测离子的电导值，改善信噪比。灵敏度高。单柱非抑制型：淋洗液直接进入电导检测器。简单、分辨率较好。二极管阵列检测器之IsoabsorbancePlot响应特性选择性检测器，如芳烃类化合物的检测灵敏度高，可检测10-9g/mL的物质线性范围宽，104-105对温度及流动相的改变不敏感适合梯度洗提HPLC常规检测器应用举例波长的选择（2）示差折光检测器结构响应特性通用性检测器低灵敏度基线易受温度的影响不适合梯度洗提荧光检测器结构响应特性选择性检测器。如PAH，蛋白质高灵敏度，比紫外高约1000倍适合梯度洗提应用举例电导检测器结构响应特性选择性检测器，对离子型化合物有响应灵敏度高受温度的影响不能梯度洗提讨论：液相色谱检测器的选择葡萄糖产品的含量测定地下水中酚类化合物的分析矿泉水中无机阴离子的测定痕量氨基酸的分析去痛片中有效成分的分析链烷基磺酸盐的测定蛋白质的分子量测定（5）几种检测器特性比较?示差折光紫外荧光电导应用范围通用选择性高选择性选择性可否梯度淋洗不可可可不可线性范围104105103104最小检测量μgngpgng对温度敏感度敏感低低敏感溶剂使用情况无限制受限制受限制受限制四、HPLC主要类型及其选择化学键合相色谱法01液固色谱法02离子对色谱法03离子色谱法04体积排阻色谱法051.化学键合相色谱法（1）分离机理正相键合相色谱法：固定相的极性大于流动相的极性，适用于分离油溶性或水溶性的极性或强极性化合物。分配机理：分配系数x为溶质，M为溶剂反相键合相色谱法：固定相的极性小于流动相的极性，适于分离非极性、极性和离子性化合物。应用最广泛反相键合相色谱法的疏溶剂机理：溶质进入极性流动相后，排挤部分溶质分子，其疏水基团由于流动相的斥力推动而直接与非极性固定相上的烷基缔合，构成单分子吸附层，这种作用时可逆的。当流动相极性减小时，这种疏溶剂斥力下降。（2）固定相疏水基团如不同链长的烷烃（C8和C18）和苯基等极性基团如氨丙基，氰乙基、醚和醇等。类型分离方式应用特点C-18反相、离子对普适性好，保留值大。溶于水的高极性化合物、中等极性化合物C-8反相、离子对与C-18类似，保留值略小C-3,C-4反相保留值小，适合肽类和蛋白质苯基反相保留适中，选择性不同。非极性、中等极性化合物-CN反相、正相选择性与硅胶类似，保留小，用途广-NH2反相、正相分离糖类、核苷酸、固醇等二醇基正相分离有机酸、排阻分蛋白质等醚基反相、正相分离酚类、芳硝基化合物，保留比C-18强聚苯乙烯基反相pH使用范围广，对部分分离峰形好，寿命长常用固定相应用举例（3）流动相表征溶剂特性的重要参数溶剂强度ε°：溶剂分子与吸附剂的亲合程度，ε°越大，亲合力约大。溶解度参数δ：衡量溶剂极性强度的指标，δ越大，极性越强。是溶剂和溶质分子间色散力、偶极力、接受质子或给予质子能力的总和。所以δ相近的混合溶剂，它的选择性α不同。极性参数P’：溶剂与乙醇、二氧六环、硝基甲烷相互作用的度量，比较全面的反映了溶剂的性质。粘度η：溶剂Eηε°δPˊxexdxn正己烷1.880.300.017.30.1???四氢呋喃7.60.460.579.14.00.380.200.42乙腈37.50.340.6511.85.80.310.270.42甲醇32.70.540.9512.95.10.480.220.31水78.50.89?2110.20.370.