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结核感染T细胞斑点试验在肺结核中的诊断价值
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抗结核治疗的基本原则是早期、联合、适量、规律、全程，如何早期诊断结核病是结核病防控工作中的一个难题，我国结核感染率和卡介苗接种率均高，结核菌素试验对于活动性结核的诊断价值低，同时不能排除非结核分枝杆菌感染。近年来，有一种用于诊断结核分枝杆菌感染的新方法，即结核感染T细胞斑点试验，用于诊断潜伏性结核分枝杆菌感染及结核病。本研究采用结核感染T细胞斑点试验和结核菌素试验两种检测方法在疑似肺结核病人中进行对比研究，探讨两者在结核诊断中的敏感性。现将结果报告如下。
1.资料与方法
1.1一般资料：选择2014年9月-2016年12月在我科住院胸片或者胸部CT疑似肺结核的患者53例，其中男45例，女8例，年龄19-86〔平均（46.94±18.77）〕岁，在其他详细检查基础上，同时作结核感染T细胞斑点试验、结核菌素试验、结核抗体、痰找抗酸杆菌检测，根据临床表现、影像学检查、病原学检查、组织病理学以及抗结核试验治疗追踪随访。最后确诊14例，排除肺结核4例，临床诊断35例。临床诊断+确诊肺结核患者共49例，其中男42例，女7例，年龄19-86〔平均（46.53±18.46）〕岁。
1.2方法：结核感染T细胞斑点试验检测方法根据试剂盒说明书步骤进行操作。首先抽取所有患者外周静脉血液5ml，分离出外周血单个核细胞（PBMC）。在已包被抗IFN-γ抗体微量板的4个孔中，分别加入不同的阳性对照物：植物血凝素，阴性对照细胞营养液，A抗原早期分泌性靶抗原6（ESAT-6）以及B抗原滤液培养蛋白10（CRP-10）.然后依次向每孔加入2ⅹ105浓度PBMC，放置在37.0℃条件下CO2培养箱内孵育处理20小时。PBS溶液洗脱处理后再加入碱性磷酸酶标记的抗γ干扰素抗体，在室温条件下孵育处理2小时，PBS溶液洗脱处理后显色，采用PBS溶液终止反应。最后仔细计数斑点数。结果判断：空白对照孔斑点数为0-5个时且（抗原A或抗原B孔的斑点数）-（空白对照孔斑点数）≥6，判断为阳性；空白对照孔斑点数为6-10个时且（抗原A或抗原B孔的斑点数）≥2ⅹ（空白对照孔斑点数），判断为阳性；上述标准不符合且阳性质控对照孔正常时检测结果为“无反应性”。
结核菌素试验：取0.1ml体积的PPD（含5单位结核菌素）对患者行前臂尺侧皮内试验，24小时、48小时、72小时观察检测结果。结核菌素试验阳性结果为硬结直径≥10mm。
1.3统计学方法：统计3种检测方法的灵敏性和准确率，以P＜0.05为有统计学差异，卡方检验计数资料。
2.结果
确诊肺结核14例中，结核抗体、PPD试验、结核感染T细胞斑点试验同时阳性3例，结核抗体、PPD试验同时阳性1例，结核抗体、结核感染T细胞斑点试验同时阳性2例，PPD试验、结核感染T细胞斑点试验同时阳性5例，单纯PPD试验阳性1例，单纯结核抗体阳性1例，单纯结核感染T细胞斑点试验阳性1例。确诊肺结核、临床诊断肺结核、临床诊断+确诊肺结核患者结核抗体、PPD试验、结核感染T细胞斑点试验阳性率见表1.
3种检测方法相关数据如表1所示
方法
确诊肺结核阳性率（%）
临床诊断肺结核阳性率（%）
确诊+临床诊断肺结核阳性率（%）
结核抗体
50%（7/14）
45.71%（16/35）
46.94%（23/49）
PPD试验
64.29%（9/14）
57.14%（20/35）
59.18%（29/49）
结核感染T细胞斑点试验
71.43%（10/14）
82.85%（29/35）
79.59%（39/49）
P值和P*值
P＞0.05、P*＞0.05
P＜0.01、P*＜0.05
P＜0.01、P*＜0.05
注：P值：结核抗体和结核感染T细胞斑点试验比较，P*值：PPD试验和结核感染T细胞斑点试验比较。
3.讨论
临床常用结核菌素试验等免疫学方法对结核病进行筛查〔1〕，操作简单，能够为抗结核经验性治疗提供依据，但假阴性和假阳性结果较多。细菌学检查是诊断结核的最可靠标准〔2〕，但常规培养时间较长，BACTEC960分枝杆菌分析系统也需要2周分离MTB，且阳性率受标本中细菌数量的影响，不利于及时诊断。血清学检查是诊断结核病的一种辅助手段，但敏感度和特异度均较低。结核感染T细胞斑点试验为结核病诊断提供了新的途径。
结核感染T细胞斑点试验在欧洲已经获得批准作为结核感染和结核潜伏感染筛查的重要检测手段。目前，已有较多临床研究证实结核感染T细胞斑点试验在活动性肺结核、肺外结核的敏感度、特异度优于PPD试验〔3〕，尤其在合并免疫抑制及结核潜伏感染的诊断中，极有可能替代PPD试验用于结核筛查〔4〕。
结核感染T细胞斑点试验对免疫正常的成年
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