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牦牛片形吸虫病诊断技术

1范围

本文件规定了牦牛片形吸虫病（肝片吸虫和大片形吸虫）的临床诊断方法、病原检查诊断方法和病理检查诊断方法。

本文件适用于牦牛片形吸虫病的诊断、流行病学调查及检疫。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

NY/T1950-2020片形吸虫病诊断技术规范

NY/T541-2016兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1牦牛片形吸虫病yakfascioliasis

由片形科（Fasciolidae）、片形属（Fasciola）的肝片吸虫（Fasciolahepatica）和大片形吸虫（Fasciolagigantica）单独或混合寄生于牦牛的肝胆管内引起的一种吸虫病。

3.1.1肝片吸虫Fasciolahepatica

牦牛肝片吸虫是寄生于牦牛肝胆管内的一种吸虫，虫体背腹扁平，呈叶片状，新鲜虫体呈棕红色，可引起牦牛急性或慢性肝炎和胆管炎，并伴发全身性中毒和营养障碍。

注：肝片吸虫虫体的形态见附录A图A.1。

3.1.2大片形吸虫Fasciolagigantica

牦牛大片形吸虫是寄生于牦牛肝胆管内的一种大型吸虫，虫体呈叶片状、略透明，可引起牦牛急性或慢性肝炎和胆管炎，对肝脏的损伤比肝片吸虫严重。

注：大片形吸虫虫体的形态见附录A图A.2。

4临床诊断

4.1临床症状

4.1.1急性型

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临床症状表现为体温升高、精神沉郁、绝食，几天内因严重贫血出现死亡。

4.1.2慢性型

被毛无光泽，伴有脱毛现象；同时食欲减退，眼睑、下颌、胸部和腹下水肿；患严重肝炎或胆管炎时，常发生全身性中毒和营养不良等症状。

4.2流行特点

牦牛片形吸虫病在世界各牦牛主产区均有发生。在我国，两种片形吸虫均有分布，其中肝片形吸虫主要分布在我国青藏高原及毗邻的青海、西藏、四川、甘肃、新疆和云南等6个省和自治区；而大片形吸虫流行范围则相对局限，常见于云南地区。本病呈季节性流行，感染季节多在夏、秋两季，秋末及冬季发病较多。

5病原检查诊断方法

5.1虫卵检查

5.1.1材料

样品保存袋、记号笔、防水标签纸、300mL带刻度的三角烧瓶、200mL玻璃杯、1.6%氢氧化钠溶液（见附录B.1）、饱和盐水（见附录B.2）、60目铜丝筛、胶帽吸管、玻璃棒、10mL吸管、10mL离心管、离心机、镊子、载玻片和盖玻片、天平、显微镜等。

5.1.2样品采集、保存和运输5.1.2.1粪便的采集

若是群体采样，采集牦牛新鲜粪便：成年牛群不少于300g，幼年（3岁以内）牛群不少于100g；若是个体采样，牦牛个体数应在20头及以上，采集量成年牛不少于100g，幼年牛不少于50g。

5.1.2.2粪便的保存

样品采集后置于样品保存袋中，封口后，每份样品的包装样品的包装袋上均要贴上标签，写明采集地点、采集时间、牦牛种类、年龄、粪便性状等详细资料，置于2°C~8°C冰箱内保存。

5.1.2.3样品的运输

将所采集样品在24h内送往实验室进行检测，运输条件应符合NY/T541-2016。

5.1.3操作

5.1.3.1定性检查——沉淀法

取新鲜粪便10g放入玻璃杯中，加10mL水搅成糊状，然后再加20倍体积水进行均匀混合，用60目铜丝筛网滤入另一玻璃杯中，把滤过的粪便混悬液静置沉淀30min后，倒掉上清液，再继续加水混合，静置沉淀。静置的时间可逐渐缩短，但至少要10min。这样反复进行，直到上清液透明为止。最后吸取沉淀物放在载玻片上，加盖玻片在显微镜下作定性检查。

5.1.3.2定性检查结果判定

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肝片吸虫虫卵较大，呈长椭圆形，黄色或黄褐色，前端较窄，后端较钝，一端有盖，卵盖不明显，卵壳薄而光滑，半透明，分2层，卵内充满卵黄细胞和1个胚细胞。虫卵大小为（100μm~158μm）×（70μm~90μm）。大片形吸虫虫卵形态与肝片吸虫虫卵相似，但比肝片吸虫虫卵大，呈深黄色，大小为（144μm~208μm）×（70μm~109μm），胚细胞位于卵盖一端。

注：肝片吸虫虫卵的形态见附录A图A.3，大片形吸虫虫卵的形态见附录A图A.4。5.1.3.3定量检查——虫卵定量计数法

称取牦牛粪便30g，放入300mL容量的三角烧瓶中，加入50mL1.6%浓度的氢氧化