1-2-2微生物的选择培养和计数高中生物学人教版选择性必修3 生物技术与工程.pptxVIP

1.2.2微生物的选择培养和计数;

》一.选择培养基

1.自然界中目的菌株筛选：

科学实例-寻找耐高温的DNA聚合酶

PCR是一种在体外DNA复制的技术，此项技术要求使用耐高温(93℃)的DNA聚合酶。;

2.实验室中目的菌株的筛选：

人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等),同时抑制或阻止

其他微生物生长。

3.选择培养基：

允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。;

尿素[CO(NH?)?]含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产

中一种重要的氮肥。尿素被土壤中某些细菌分解成NH?,再被转化为

NO?-、NH?+等被植物吸收。

这些细菌之所以能分解尿素，是因为能合成脲酶，来催化尿素分解。脲酶

CO(NH?)2+H?O2NH?+CO?尿素的立体结构

1.你如何设计培养基配方，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来?

培养基添加尿素作唯一氮源，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素、缺乏氮源而不能生长发育繁殖。

2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点?见P?8页培养基配方;

KH?PO?;

1.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入(C)

A.较多的氮源物质B.较多的碳源物质

C.青霉素类药物D.高浓度食盐

2.某些土壤细菌可将尿素[CO(NH?)?]分解为CO?和NH?供植物吸收和利用，但分解物CO?不能为该菌提供营养。下列关于配制分离这一菌种的选择培养基的成分符合要求的是(B)

A.仅尿素B.尿素+葡萄糖

C.仅葡萄糖D.牛肉膏+蛋白胨;

提出问题：土壤中有能分解尿素的细菌，我们如何分离它们?并研究1g土壤样品中含有多少这样的细菌?

原理：通过对土样进行充分稀释，再

将菌液涂布到制备好的培养基上，即

可得到能分解尿素的细菌的纯培养物。

阅读课本19页探究实践，总结实验流程：

1、选择培养基的制备

2、对土壤样品进行稀释

3、稀释涂布平板法操作

4、微生物的培养与观察;

葡萄糖;

2.稀释土壤样品

(1)土壤取样

细菌宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤??生长，绝大部分分布在距地表3~8cm的土壤层。铲去表层土3cm左右，取样，将样品装入事先准备好的信封中。;

2.稀释土壤样品

(2)样品的稀释(梯度稀释菌液)

将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。;

问在初次实验中，对于稀释的范围没有把握，怎样做才能保证从中

选择出菌落数在30～300的平板进行计数?

选择一个比较宽的范围，将1×103~1×107倍稀释的稀释液分别涂布到平板上培养，以保证能从中选择出菌落数在30～300的;

④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。;

②本实验使用的平板和试管较多，为了避免混淆，最好在使

用前做好标记。

例：标记注明组别、培养日期和平板上培养样品的稀释度等。;

4.微生物的培养与观察

①不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌一般在30-37℃的温度下培养1-2d。

②每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。

③一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征。;

在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，

指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。

①液体培养基可以直接看液体的变色情况；

②固体培养基上可以观察菌落周围是否出现红色环带，红色环带直径与菌落直径比值越大，说明分解能力越强。;

鉴别培养基：在培养基中加入某种指示剂或化学药品(不影响微生物正

常生长),使微生物的某种代谢产物与培养基中的特定指示剂或化学药品发生反应。从而达到鉴定的作用。;

比较;

[解析]平板划线法不能用于计数，用于计数的是稀释涂布平板法，A错误；

当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个单菌落，B正确；

为了保证结果准确，一般选取菌落数在30~300的平板进行计数，C错误；

稀释涂布平板法又称活菌计数，是由一个单细胞可繁殖成单个菌落这一培养特征设计的计数方法，可对微生物进行计数，而平板划线法不能用于计数，D错误。

[解析]稀释涂布平板法不用接种环接种，A错误；

平板划线法和稀释涂布平板法可使用成分相同的固体培养基，B正确；