基因工程基本操作程序.ppt

基因工程的基本操作程序

苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。

想一想需要做哪些关键工作？苏云金芽孢杆菌毒蛋白普通棉花抗虫棉毒蛋白基因苏云金芽孢杆菌棉花细胞基因工程培育抗虫棉的简要过程：普通棉花(无抗虫特性)苏云金芽孢杆菌提取抗虫基因通过运载体导入转基因棉花含抗虫基因转基因棉花产生相应蛋白质转基因棉花有抗虫特性基因工程的基本操作程序一、目的基因的获取二、基因表达载体的构建三、将目的基因导入受体细胞四、目的基因的检测与鉴定一、目的基因的获取主要是编码蛋白质的结构基因获取方法：1、从基因文库中获取目的基因2、利用PCR技术扩增目的基因3、化学方法人工合成外显子内含子与RNA聚合酶结合位点编码区非编码区非编码区非编码区非编码区与RNA聚合酶结合位点编码区原核生物基因真核生物基因补充:1、从基因文库中获取目的基因将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。基因文库基因组文库部分基因文库(CDNA文库)某生物体内全部DNA许多DNA片段受体菌群体1、从基因文库中获取目的基因限制酶与运载体连接导入基因组文库某种生物某个时期的mRNAcDNA反转录受体菌群体与运载体连接导入部分基因文库（cDNA文库）IMN基因组文库的构建概念：原理：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。体外DNA复制前提：一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物。条件：（1）模板DNA(需含有目的基因)（2）四种脱氧核苷酸(dNTP)（3）耐高温的DNA聚合酶(Taq酶）2、利用PCR技术扩增目的基因3、通过DNA合成仪用化学方法人工合成蛋白质的氨基酸顺序mRAN核苷酸序列基因DNA的核苷酸序列目的基因推测推测合成当基因比较小、蛋白质的氨基酸序列可以测得或核苷酸序列已知时，可采用此种方法。二、基因表达载体的构建-----------核心基因表达载体的构建过程质粒DNA分子限制酶处理两个切口获得目的基因DNA连接酶重组DNA分子（重组质粒）同一种一个切口两个黏性末端复制原点+启动子+目的基因+终止子+标志基因基因表达载体的组成三、将目的基因导入受体细胞常用的受体细胞：有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。将目的基因导入受体细胞的原理借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。三、将目的基因导入受体细胞1.将目的基因导入植物细胞农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法2.将目的基因导入动物细胞显微注射技术3.将目的基因导入微生物细胞Ca2+处理1.将目的基因导入植物细胞农杆菌转化法：显微注射技术提纯基因表达载体体外显微注射入受精卵受精卵移植2.将目的基因导入动物细胞3.将目的基因导入微生物细胞常用原核生物作为受体细胞的原因：原核生物特点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等方法:Ca2+处理