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(系、部)化学与生物工程学院专业生物技术（师范）年级13级学号

姓名组别第二组课程名称植物细胞工程学

实验日期2016.3-6

指导老师实验名称植物组织培养综合实验

一、实验目的

1.熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法

2.学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法；

3.掌握超净工作台上的接种方法与注意事项，了解接种室的灭菌方法；

4.了解组织培养的基本程序；

5.掌握接种的方法和材料的培养过程；

6.掌握无菌操作技术，包括外植体除菌和接种技术；

7.观察外植体的生长状况、染菌状况，剔除染菌外植体；

8.了解MS培养基和1/2MS培养基的区别

二、实验原理

1.植物细胞的全能性

一切植物都由细胞构成，细胞是构成植物体的基本结构与功能单位。植物

细胞含有全套遗传信息，具有形成完整植物的潜能。

2.植物细胞表现出全能性的条件

1.离体状态；

2.有一定的营养物质，激素和其他外界条件（无菌、温度、pH）；

3.选择性能优良、细胞全能性表达充分的基因型

3.无菌条件

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养基上繁殖。用于进行组织培养的组织、器官和细胞称为外植体。在组培中外

植体都死带菌的，在接种前必须进行表面消毒，这时取得培养成功的最基本和

重要的前体。组织培养的主要过程都是在无菌条件下进行的，所以所有的器材、

植物体、接种室都应是无菌的。

4.脱分化与愈伤组织

已有特定结构与功能的植物组织，在一定条件下，其细胞被诱导改变原来

的发育途径，逐步逆转其原有的分化形态，转变为具有分生能力的胚细胞的过

程称为脱分化。脱分化所用的化学物质与MS培养基的区别是需要激素诱导。

所以脱分化培养需在MS培养基上添加激素进行愈伤组织诱导。

5.培养基

植物组织培养常用的培养基为MS培养基。常用的凝固剂是琼脂,它的主要

作用是使液体培养基凝固，琼脂本身并不提供任何营养，它只是一种高分予的

碳水物从海藻中提取出来，仅溶解于热水，成为溶胶，冷却后(40℃以下)即凝

固为固体状凝胶。琼脂的用量一般在4—10克／升之间。琼脂的凝固能力除与

原料、厂家的加工方式等有关外，还与高压灭菌时的温度、时间、pH值等因

素有关，长时间的高温会使凝固能力下降，过酸过碱加之高温会使琼脂发生水

解而丧失凝固能力，存放时间过久，琼脂变褐，也会逐失去凝固能力。MS培

养基属于富盐平衡培养基，特点是：无机盐浓度较高，元素间的比例适当，离

子平衡性好，具有较强的缓冲性，因而在培养的过程中可维持较好的稳定性；

营养丰富，在一般培养中无须额外加入复杂的有机成分；微量元素种类全，浓

度高。这类培养基是目前使用最广泛的培养基。

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生长调节物质

包括天然植物激素额人工激素类似物。植物激素是一类植物自身合成、同

时对其生长发育具有重要调节作用的有机化合物。生长调节物质对于离题培养

中的细胞分裂分化、器官形成和个体再生等均起着重要而明显的调节作用。一

般来说，基本培养基只能保证培养物的生存，维持其最低的生理活动，而只有

植物激素的配合使用，才能完成离体培养物中按照需要设计的各个调节环节。

常用的植物组培激素种类主要有生长素类、细胞分裂素类、赤霉素。

1)生长素的生理作用主要是促进细胞分裂和生长，有利于