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2024细胞外囊泡分离与检测技术专家共识要点(全文)

细胞外囊泡(extracellularvesicle,EV)是活细胞向细胞外释放的纳米级脂质双分子层囊泡。它主动分选了源自母体细胞的重要生物大分子，包括DNA、RNA、蛋白、脂质、糖类、代谢物质等。作为这些大分子的集合体，EV释放至胞外基质后，可通过血液体液循环到达远处器官与组织，然后被受体细胞所摄取并影响其生物学功能。因此EV广泛参与人体的生理病理过程，在疾病诊疗领域展现了巨大潜力。尤其在液体活检领域，EV作为标志物具有独特优势：(1)外周稳定性好：其双层脂质膜结构可保护内含物在外周循环中不易被降解；(2)诊断灵敏度高：在疾病早期阶段，病变细胞即可释放EV至血液体液，可反映早期病变过程；(3)组织特异性强：分析特定细胞来源的EV亚群可以提供疾病组织定位线索，对直接取样困难的疾病，如中枢神经系统疾病，具有重要诊断价值。然而，现有EV分离与检测技术种类较多，且各有优缺点。为了更好地推动EV的临床应用和转化，本共识总结了当前EV分离和检测各类技术的优势和局限，并为具体应用场景提供了推荐意见。同时，这一共识的制定汇聚了多个相关领域专家的观点和经验，包括医学检验、基础医学、临床医学、分析化学、生物学和材料科学等，旨在为促进EV在检验医学领域的研究与应用提供更加全面客观的指导意见。

制定方案

一、共识发起机构与专家组成员

本共识由中国研究型医院学会细胞外囊泡研究与应用专业委员会

(ChineseSocietyofExtracellularVesicles,CSEV)和中华医学会检验医学分会分子诊断学组共同组成的专家组(以下简称专家组)牵头制订。2023年7月14日启动，成员间多次线上线下反复讨论形成初稿，之后召开3次专家组研讨会，最终针对推荐意见进行投票表决，于2024年4月10日完成定稿。本共识专家组成员均填写了利益声明表，不存在与本共识直接相关的利益冲突。

二、使用者与应用的目标人群

本共识适用于高校、科研院所、生物技术公司或体外诊断企业及不同医疗机构从事EV研究与转化应用的科技人员或医务工作者等，涵盖常用的EV分离与检测技术与方法，旨在为EV应用于临床检验的研究与转化提供参考。

三、基本框架构思与确定

专家组通过线下讨论的形式，初步拟定EV应用于临床检验所面临的核心问题，经多次讨论与修改，最终围绕四大问题进行，包括EV定义与命名、样本收集与前处理、EV分离技术、EV检测技术，并形成了9条推荐意见。

四、证据的检索

专家组根据最终选定的四大问题，根据EV中涉及的不同样本来源与不同的技术原理进行解构，通过Pubmed、WebofScience、中国知网、万方与维普等数据库，综合国内外研究进展进行证据选择。最终选择66篇文献作为该共识的依据。

五、证据的评价与分级

专家组根据文献依据，对每个推荐意见的必要性进行二次讨论，对于证据不充分的建议进行了删除。根据推荐分级办法，专家组对更新后的共识推荐进行投票表决。

共识内容

一、EV的定义与命名

EV泛指由各类细胞释放的微小囊泡颗粒，其由脂质双分子层包裹，无法自我复制且不含功能性细胞核[1]。建议使用通用术语“EV”指代

各类囊泡亚群，或基于EV理化性质对所提取EV进行命名。如基于大小、

密度等特征对EV亚型进行命名，包括“小EV”(smallEV,sEV)和“大”

(largeEV,1EV),轻EV(lightEV)和重EV(heavyEV)等。然而，需要注意的是，当前对于EV特定的理化性质尚无明确界定。例如，sEV

在不同文献中被广泛使用，但其上下限尺寸并未完全统一。同时，许多分离方法如差速超速离心法(differentialultracentrifugation,dUC)所产生的EV亚群尺寸分布存在重叠。因此，研究人员应意识到这些术语的局限性[2]。

应避免使用定义模糊且具有误导性的术语。如与EV生成途径相关的术语，“exosome”和“ectosome”等，只应在有强有力证据支撑时谨慎使用。尽管在某些情况下，药物或遗传干预可以抑制或刺激特定EV的生成或释放，大多数当前EV分离和表征技术无法区分由不同生成机制产生的EV。除此之外，需要特别指出的，“小EV”与exosome并非同义词：小EV群体泛指各类尺寸较小的EV,是一个相对性的概念，可能包括了同样尺

寸较小的ectosome和ex