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青蒿素生物合成相关基因的克隆、大肠杆菌表达与分子分析--第1页
要
利用现代分子生物学和基因工程技术手段，克隆青蒿索生成途径的关键酶
基因，研究关键酶基因对青蒿素生物合成的调控规律，是打破青蒿素生物合成
的限速步骤，大幅度提高青蓠素含量，最终达到利用植物生物技术工业化生产
青蒿素的目的必须解决的关键阀题。本论文基于此目的，开展了青蒿素生物合
成相关基因的分子克隆工作。
用ＲＡＣＥ方法从青蒿高产株系００１中克隆了一个新的１８８６ｂｐ的全长倍半
萜合酶ｅＤＮＡ。晓隆的倍半萜合酶氨基酸序列与烟草马兜铃烯合酶、莨菪岩兰
二烯合酶、棉花杜松烯合酶的一致性分别为３９％，３８％和４１％；与青蒿柏
木脑合酶、紫穗槐二烯合酶和一个推测的倍半萜合酶克隆ｃＡＳＣｌ２５的一致性为
５０％，４８％和５９％。ｃＤＮＡ编码区序列被克隆进原核表达载体ｐＥＴ一３０ａ，并在大
肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中诱导表达，但过量表达的蛋自主要是以不溶性蛋白形式
存在。ＲＴ－ＰＣＲ分析表明此基因在茎、叶和花中表达，在根中没有表达。＼
用ＲＴ／ＰＣＲ方法从青蒿高产株系００１中克隆了ａｍｏｒｐｈａ－４，１１－ｄｉｅｎ
ｅＤＮＡ。ｉ将该ｅＤＮＡ插入原核表达载体ｐＥＴ３ｄ并在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中过
量表达。Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析表明ＡＭＳ基因在青蒿基因组中至少有３个拷贝。ＡＭＳ
基因组ＤＮＡ有一个复杂的结构，包含有７个外显子和６个内含子。ＲＴ／ＰＣＲ分
析表明ＡＭＳ基因在叶片、茎和花中表达，而在根中没有表达。
用ＲＡＣＥ方法首次从青蒿中克隆了一个１５３９ｂｐ全长鲨烯合酶ｅＤＮＡ。青
蒿鲨烯合酶氨基酸序列与拟南芥、烟草、人类、酵母鲨烯合酶的一致性分别为
７０％、７７％、４４％、３９％。青蒿鲨烯合酶基因组ＤＮＡ有一个复杂的结构，包括
１４个外显子和１３个内含子。全长的或Ｃ末端截短的鲨烯合酶ｃＤＮＡ被克隆进
原核表达载体ｐＥＴ３０ａ并在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中诱导表达。但在含有全长
的鲨烯合酶ｅＤＮＡ的大肠杆菌中并没有观察到预期大小的鲨烯合酶表达，而Ｃ
末端截短３０个疏水氨基酸的鲨烯合酶可在大肠杆菌中过量表达。｛
关键词：童：重量豢，譬麴盒感樽羞基因、分子克隆、大肠杆菌过量毒
艇
青蒿素生物合成相关基因的克隆、大肠杆菌表达与分子分析--第1页
青蒿素生物合成相关基因的克隆、大肠杆菌表达与分子分析--第2页
Ａｂｓｔｒａｅｔ
Ｌｉｕ
Ｙａｈ（Ｂｏｔａｎｙ）
ＹｅａｎｄＬｉ
ＤｉｒｅｃｔｅｄＰｒｏｆｅｓｓｏｒＨｅｃｈｕｎＰｒｏｆｅｓｓｏｒ
ｂｙＧｕｏｆｅｎｇ
ｉｎｔｈｅａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ
ｄｏｗｎｔｈｅｒａｔｅ—ｌｉｍｉｔｅｄ
Ｉｎｂｒｅａｋｔｏ
ｏｒｄｅｒｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ
ｔｏｓｔｅｐｓ
ａｎｄｔｈｅ
ｔｈｅａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎｒｅａｌｉｚｅｉｎｄｕｓｔｒｉａｌｏｆ
ｉｍｐｒｏｖｅ
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