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质粒DNA的小量提取及DNA琼脂糖凝胶电泳实验报告--第1页
质粒DNA的小量提取及DNA琼脂糖凝胶电
泳
一、前言
质粒
质粒是附加到细胞中的非细胞的染色体或核区DNA原有的能够
自主复制的较小的DNA分子(即细胞附殖粒、又胞附殖粒)。大部分的
质粒虽然都是环状构型,它存在于许多细菌以及酵母菌等生物(多为
原核生物)中,乃至于植物的线粒体等胞器中。然而,1984年,在
Streptomycescoelicoler(天蓝色链霉菌)等放线菌以及在Borrelia
hermsii(赫氏蜱疏螺旋体)等原核生物中,又相继发现线形质粒。
天然质粒的DNA长度从数千碱基对至数十万碱基对都有。质粒
天然存在于这些生物里面,有时候一个细胞里面可以同时有一种乃至
于数种的质粒同时存在。质粒的套数在细胞里从单一到数千都有可能。
有时有些质粒含有某种抗药基因(如大肠杆菌中就有含有抗四环素基
因的质粒)。有一些质粒携带的基因则可以赋予细胞额外的生理代谢
能力,乃至于在一些细菌中提高它的致病力。一般来说,质粒的存在
与否对宿主细胞生存没有决定性的作用。它是基因工程最常见的运载
体。
质粒在细胞内的复制一般有两种类型:紧密控制型和松弛控制型。
前者只在细胞周期的一定阶段进行复制,当染色体不复制时,它也不
能复制,通常每个细胞内只含有一个或几个质粒分子,如F因子。后
...
质粒DNA的小量提取及DNA琼脂糖凝胶电泳实验报告--第1页
质粒DNA的小量提取及DNA琼脂糖凝胶电泳实验报告--第2页
者的质粒在整个细胞周期中随时可以复制,在每个细胞中有许多拷贝,
一般在20个以上,如ColE1质粒。在使用蛋白质合成抑制剂-氯霉
素时,细胞内蛋白质合成、染色体DNA复制和细胞分裂均受到抑制,
紧密型质粒复制停止,而松弛型质粒继续复制,质粒拷贝数可由原来
20多个扩增至1000-3000个,此时质粒DNA占总DNA的含量可由
原来的2%增加至40-50%。
把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术,送进受体细胞
中去进行繁殖和表达的工具叫载体。细菌质粒是重组DNA技术中常
用的载体。质粒分子本身是含有复制功能的遗传结构。质粒还带有某
些遗传信息,所以会赋予宿主细胞一些遗传性状。其自我复制能力及
所携带的遗传信息在重组DNA操作,如扩增、筛选过程中都是极为
有用的。
质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工
构建的。与天然质粒相比,质粒载体通常带有一个或一个以上的选择
性标记基因(如抗生素抗性基因)和一个人工合成的含有多个限制性内
切酶识别位点的多克隆位点序列,并去掉了大部分非必需序列,使分
子量尽可能减少,以便于基因工程操作。大多质粒载体带有一些多用
途的辅助序列,这些用途包括通过组织化学方法肉眼鉴定重组克隆、
产生用于序列测定的单链DNA、体外转录外源DNA序列、鉴定片段
的插入方向、外源基因的大量表达等。一个理想的克隆载体大致应有
下列一些特性:⑴分子量小、多拷贝、松弛控制型;⑵具有多种常用的
限制性内切酶的单切点;⑶能插入较大的外源DNA片段;⑷具有两个
...
质粒DNA的小量提取及DNA琼脂糖凝胶电泳实验报告--第2页
质粒DNA的小量提取及DNA琼脂糖凝胶电泳实验报告--第3页
以上的遗传标记物,便于鉴定和筛选。⑸对宿主细胞无害。常用的质
粒载体大小一般在1kb至10kb之间,如PBR322、PUC系列、PGEM
系列和pBluescript(简
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