番茄病毒鉴定技术规程.docx

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番茄病毒鉴定技术规程

1范围

本文件规定了番茄病毒鉴定中的术语与定义、检测对象、抽样、取样部位、鉴定方法和判定规则等内容。

本文件适用于内蒙古侵染番茄的病毒种类的鉴定。2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

番茄Solanumlycopersicum

茄科茄属一年生或多年生草本植物，原产于南美洲，如今在世界各地广泛栽培。

3.2

逆转录-聚合酶链式反应Reversetranscription-polymerasechainreaction（RT-PCR）聚合酶链式反应Polymerasechainreaction（PCR）

提取番茄样品的总RNA（总DNA），对于RNA病毒，以其中的mRNA为模板，利用逆转录酶反转录合成cDNA，再以cDNA为模板使用侵染番茄的病毒特异性引物进行聚合酶链式反应；对于DNA，以总DNA稀释液（按浓度比例稀释）为模板使用侵染番茄的病毒特异性引物进行聚合酶链式反应。

4检测对象

主要鉴定病毒种类：

1)苜蓿花叶病毒（Alfalfamosaicvirus，AMV）

2)蚕豆萎蔫病毒2（Beanbroadwiltvirus2，BBWV2）

3)辣椒脉斑驳病毒（Chilliveinalmottlevirus，ChiVMV）

4)黄瓜花叶病毒（Cucumbermosaicvirus，CMV）

5)凤果花叶病毒（Pepinomosaicvirus，PepMV）

6)车前草花叶病毒（Plantagoasiaticamosaicvirus，PlAMV）

7)辣椒轻斑驳病毒（Peppermildmottlevirus，PMMoV）

8)马铃薯S病毒（PotatoVirusS，PVS）

9)马铃薯X病毒（PotatoVirusX，PVX）

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10)菠菜潜隐病毒（Spinachlatentvirus，SpLV）

11)南方番茄病毒（Southerntomatovirus，STV）

12)番茄不孕病毒（Tomatoaspermyvirus，TAV）

13)番茄黑环病毒（Tomatoblackringvirus，TBRV）

14)烟草蚀纹病毒（Tobaccoetchvirus，TEV）

15)烟草轻型绿花叶病毒（Tobaccomildgreenmosaicvirus，TMGMV）

16)烟草花叶病毒（Tobaccomosaicvirus，TMV）

17)番茄褐色皱纹果病毒（Tomatobrownrugosefruitvirus，ToBRFV）

18)番茄丛矮病毒（Tomatobushystuntvirus，ToBSV）

19)番茄褪绿病毒（Tomatochlorosisvirus，ToCV）

20)番茄斑驳花叶病毒（Tomatomottlemosaicvirus，ToMMV）

21)番茄花叶病毒（Tomatomosaicvirus，ToMV）

22)番茄斑萎病毒（Tomatospottedwiltvirus，TSWV）

23)芜菁黄化病毒（Turnipyellowsvirus，TuYV）

24)烟草脉带花叶病毒（Tobaccoveinbandingmosaicvirus，TVBMV）

25)番茄环纹斑点病毒（Tomatozonatespotvirus，TZSV）

26)番茄黄化曲叶病毒（Tomatoyellowleafcurlvirus，TYLCV）

27)中国番木瓜曲叶病毒（PapayaleafcurlChinavirus，PaLCuCNV）确定依据：参考国内外番茄病毒研究相关论文确定。

5抽样

采用5点取样法随机抽取。1000株以内抽检10株(含1000株)；1000株～10000株(含10000株),首个100株抽100株，之后每增加1000株增检5株，不足1000株按1000株计；超过10000株，第1000~10000株按上述方法抽样，之后每增加1000株增检20株，不足1000株按1000株计。

6取样部位

疑似病毒病感染的番茄植株，症状如花叶、皱缩、畸形、黄化、坏死等。取番茄植株茎秆和叶柄放置于自封袋内，4℃保存不超过24h或液氮预冷后立即放置于-80℃长期保存备用，其成熟果实保留种子备用。

7鉴定方法

7.1逆转录聚合酶链式