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原子力显微镜在细胞生物学领域的应用

材料科学与工程学院5120519012蒋沐阳

摘要原子力显微镜是近年来生物领域的重要观测工具，它优良的观测性能和强大清晰

的观测分辨率能够满足细胞生物领域不同的观测需求。本文将阐述原子力显微镜在细胞观

测中的工作原理，以及待观测细胞需要经过怎样的固定处理。另外本文也将展现原子力显

微镜在分析细胞的生命历程以及细胞、分子间的各种相互作用力的性能。

关键字原子力显微镜，细胞生物，成像分辨率，力-距离曲线

前言

几百年来，人类为了观察微小物体创造出了一代又一代显微镜，从最原始的光学显微

镜，到以电子显微镜（SEM）为代表的第二代显微镜，再到以扫描隧道显微镜（TEM）为代

表的新型显微技术，都显示出了各自代表时代科学家的智慧。而在1986年，作为扫描隧道

显微镜的改进产品，原子力显微镜（AFM）的出现，更是突出的显现了显微观测技术作为人

类视觉感官功能的延伸与增强的重要性。[1]不同于扫描隧道显微镜只能应用于导电物体表

面，原子力显微镜在非导电物质的观测上效果出色，并且具有高分辨、制样简单、操作易

行的特点。它在纳米尺度上的成像分辨率极佳，横向达到0.1~0.2nm，纵向则高达

0.01nm，[2]这样的性能使得前几代显微镜望尘莫及，也极大地推动了纳米科学的发展。因

为原子力显微镜在观测过程中能够保持样品的自然状态，防止其发生变形或变性，并且能

够实现对生物样品的连续动态分析与成像，所以它的出现对于微观分析要求极高的生命科

学领域无疑是一块大大的宝藏，发明至今，原子力显微镜已经帮助科学家们在细胞生物学

领域取得了长足的进步。

1原子力显微镜原理简介

简单地说，原子力显微镜（AtomicForceMicroscopy）是通过控制并检测样品与显微

镜配备的针尖间的相互作用力来实现高分辨成像的。[2]它将扫描的针尖制作在一个对微弱

力极为敏感的V字型的微悬臂上，微悬臂的另一端固定住，使得针尖趋近样品并与样品表

面轻轻接触。通过压电陶瓷管的伸缩可以控制原子间的作用力恒定，微悬臂由此可以随着

样品表面的起伏而震动，通过光学检测方法可以得到样品形貌的信息。

2原子力显微镜在细胞表面成像手段

原子力显微镜有三种工作方式：接触式（ContactMode），非接触式（Non-Contact

Mode）和轻敲式（TappingMode）。[3]在接触式状态下，针尖与样品的距离始终保持在零

点几纳米的斥力区域，正因为这样的距离接近接触，所以能够得到非常稳定、高分辨的图

像；而在非接触式状态下，针尖与样品的距离则大大远于接触式，主要检测原子间的范德

华力和静电力等长程力，对样品无破坏作用，但是分辨率也比接触式低；介于两者之间的

是轻敲模式。在轻敲模式下，针尖与样品有一个间断的接触，微悬臂的振动可以保证测量

的准确性。因为针尖同样品有接触，所以得到的分辨率几乎接近于接触式，而又因为接触

非常短暂，所以不大会破坏样品表面，特别适宜于分析柔软、粘性和脆性的样品，在液体

中的成像表现也良好。综合上述分析，原子力显微镜在细胞表面的成像往往采用轻敲模

式。

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在进行细胞样品观测前，为了简化观测过程，通常需要细胞固定。最常用，也最简单

的的固定法是自然干燥法，但经过此法处理的细胞与活细胞相差甚大。在经过溶液中的细

胞固定方法研究后，研究者们研究出了一套在溶液状态下通过静电作用固定样品的方法。

此方法对基底表面进行聚赖氨酸修饰，利用聚赖氨酸与细胞间的静电相互作用来固定细

胞。虽然此法简单且重复性好，但还是对细胞结构有一定影响。[1