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蛋白质透析
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蛋白质透析
在蛋白质的研究中,经常要进行蛋白质脱盐,即将蛋白质同其它盐类小分子分离开。蛋白质脱盐的方法很多,各有优缺点。以下仅介绍常用的透析和凝胶过滤方法,可根据实验条件和要求选用。
(一)蛋白质透析
目的
学习透析的基本原理和操作。
原理
蛋白质是大分子物质,不能透过透析膜而小分子物质可以自由透过。在分离提纯蛋白质的过程中,常利用透析的方法使蛋白质与其中夹杂的小分子物质分开。
仪器、试剂、材料
仪器
烧杯;玻棒;离心机;离心管;冰箱;电炉。
试剂
1%氯化钡溶液;硫酸铵粉末;1mol/LEDTA;2%NaHCO3。
材料
透析管(宽约2.5cm,长12-15cm)或玻璃纸;皮筋;鸡蛋清溶液:将新鲜鸡蛋的蛋清与水按1:20混匀,然后用六层纱布过滤。
操作方法
透析管(前)处理:先将一适当大小和长度的透析管放在1mol/LEDTA溶液中,煮沸10分钟,再在2%NaHCO3溶液中煮沸10分钟,然后再在蒸馏水中煮沸10分钟即可。
取5ml蛋白质溶液于离心管中,加4g硫酸铵粉末,搅拌使之溶解。然后在4℃
离心:将上述絮状沉淀液以1000转/分的速度离心20分钟。
装透析管:离心后倒掉上清夜,加5ml蒸馏水溶解沉淀物,然后小心倒入透析管中,扎紧上口。
将装好的透析管放入盛有蒸馏水的烧杯中,进行透析,并不断搅拌。
每隔适当时间(5-10分钟),用氯化钡滴入烧杯的蒸馏水中,观察是否有沉淀现象。
结果处理
记录并解释实验现象。
注意事项
1.硫酸铵盐一定要充分溶解,才能使蛋白质沉淀下来。
思考题
在透析袋处理过程中,EDTA和NaHCO3起何作用?
EDTA,二价金属离子螯合剂,除去钙镁等二价离子,防止他们跟目的样品螯合,影响活性
NaHCO3,中和乙酸,延长透析袋寿命。
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