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脂阿拉伯甘露聚糖（LAM）elisa定量检测试剂盒操作步

骤

脂阿拉伯甘露聚糖（LAM）elisa定量检测试剂盒

 操作步骤

 1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。

 2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

 3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别

设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入

标准品50mu;L；待测样本孔中先加入待测样本10mu;L，再加样本稀释液

40mu;L（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。

 4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

 5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗

涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗

板）。

 6、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液50mu;L，空白对照孔不加。

 7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

 8、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗

涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗

板）。

 9、显色：每孔先加入显色剂A液50mu;L，再加入显色剂B液

50mu;L，平板混匀器混匀30s（或用手轻轻震荡混匀30s），37℃避光显色

15min。

 10、终止：取出酶标板，每孔加终止液50mu;L，终止反应（颜色由蓝色立

转黄色）。

 11、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的

吸光值（OD值）。

 12、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归

方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使

用各种应用软件来计算。最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

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