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ELISA试剂盒批发免疫标记技术
ELISA试剂盒批发酶标抗体或抗抗体(抗免疫球蛋白)结合物可采用戊
二醛法或过碘酸盐氧化法制备。郭春祥建立的辣根过氧化物酶(HRP)标记抗
体的改良过碘酸钠法简单易行,标记效果好,特别适用于实验室的小批量制
备。现将操作方法介绍如下:
(一)结合物的标记将5mgHRP溶于05ml蒸馏水中,加入新配制的
006mol/LNaIO4水溶液05ml,混匀,置冰箱30min,取出加入016mol/L乙醇
水溶液05ml,室温放置30min后,加入含5mg纯化抗体的水溶液(或PBS)
1ml,混匀并装透析袋,以005mol/L、pH值95碳酸盐缓冲液缓慢搅拌透析6h
(或过一夜)使之结合,然后吸出加NaBH4溶液(5mg/ml)02ml,置冰箱
2h。将上述结合物混合液加入等体积饱和硫酸铵,冰箱放置30min,离心,将
所得沉淀物溶于少许002mol/L、pH值74PBS中,并对之透析过一夜。次日再
离心除去不溶物,即得酶抗体结合物。用002mol/L、pH值74PBS加至5ml,
进行测定后,冷冻干燥或低温保存。
(二)结合物中HRP与抗体量的测定酶标结合物于751型分光光度计上
分别用280及403nm波长测定其光密度(OD),并计算出OD403与OD280之
比值以及HRP与抗体的mol/L比。
结合物中HRP浓度(mg/ml)=OD403乘以04
结合物中IgG浓度(mg/ml)=(OD280-OD403乘以03)乘以062
酶/抗体mol/L比=HRP浓度IgG浓度乘以4
(三)结合物稀释度的测定
用酶结合物中抗体相应的抗原直接包被聚苯乙烯反应板,采用ELISA直接法
测定酶结合物效价。通常本法制备的酶结合物作1∶10000稀释时,其OD403
仍在01以上。
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