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新生儿缺氧缺血性脑病动物模型的建立

【关键词】新生儿缺氧缺血性脑病动物模型

1模型动物的选择

缺氧缺血造成的脑损伤在不成熟的大鼠、兔、绵羊及猴等实验动物模型中得到证

明，这些模型也已经提供了大量重要的信息，不仅说明了组织损伤的病理和生理机制，

而且为各种特殊治疗策略的有效性提供了有力的证据。因此，在动物实验研究中，常

以缺氧缺血性脑损伤新生动物作为研究对象。Yager等［3］曾在2004年作过统计，

在200多种新生儿HIE相关动物实验中，大鼠应用最广泛〔29%〕，接着是猪〔25%〕

和羊〔20%〕。在这些动物模型中，胚胎期或新生的恒河猴和未成熟的大鼠被研究应用

得最广泛，因为这两种新生动物在神经解剖及生理复制等方面与人类最为接近，其中

新生大鼠优势更多，如容易获取，母鼠孕期短、繁殖快，1窝可生8～15只，费用低，

有利于实验条件的控制，而新生猪、猴、羊等来源较困难，死亡率高，费用高。因此，

长期以来，国内外医学工作者常把新生大鼠作为研究新生儿HIE的首选实验动物。

2模型动物年龄的选择

用于新生儿HIE实验的模型动物有很多，我们以应用最多的新生大鼠为例。不同

年龄的大鼠其大脑发育程度是不一样的，研究发现，新生7d大鼠的中枢神经系统是不

成熟的，其发育程度类似于孕32～34周的人类胎儿或新生儿［4］，大脑皮层的神经

分层完整，生发机制退化，白质也已有少量髓鞘形成，其能量代谢、神经递质、血流

动力学、蛋白质代谢以及免疫炎性改变等均能被很好地加以特征化［5］，其继发能量

衰竭及脑电图类型与严重窒息新生儿的临床发现相似，这对于评价神经保护药物的短

期和长期疗效尤为重要。因此长期以来，研究者大多采用新生7d的大鼠作为新生儿

HIE模型动物。随着研究的深入，超低龄大鼠〔如生后1～2d大鼠〕也被用于试验中，

并且揭示出极度不成熟大脑在损伤易感性上有重要的差异，这为新生儿HIE的研究开

辟了一条新的途径。和新生7d大鼠相比，超低龄大鼠的脑损伤要求更长时间和更严重

程度的缺氧，而随之产生的同侧脑皮质下白质损伤也更加严重，主要是少突胶质细胞

的始祖细胞的死亡，这种神经细胞虽然是过渡性的，却起着非常重要的作用，它的过

早死亡也许能更好地解释在许多早产儿中普遍存在的神经系统发育异常以及单一的脑

白质损伤现象。

3模型动物的诱导方法

建立动物模型的过程应该尽量与新生儿HIE发病过程相似，这样才能更好地模拟

新生儿HIE的发生开展。单纯缺氧或单纯缺血或缺氧伴缺血是诱导缺氧缺血性脑损伤

常用的方法，这些方法在某些研究细节上有着明显的差异。长期以来，国内外采用的

新生儿HIE动物模型的诱导方法主要有：

3.1经典法

该法由Vannui于1981年在Levine的成年大鼠缺氧缺血性脑损伤模型根底上经过

改进而建成，至今二十多年在全世界被广泛应用。其具体操作方法如下：生后7d大鼠

麻醉后行左颈总动脉结扎术，术后恢复4～8h后置于氧浓度为8%、环境温度为37℃的

密闭容器内持续缺氧3.5h。该法具有不少优点，譬如容易实施，在血流变化以及细胞

代谢紊乱等方面与出生时窒息情况很相似，花费不多就能提供长时程的神经病理性损

害及功能的评估，还能用大量的动物做出保护性试剂的剂量反响性评价等。使用该方

法，大脑损伤通常局限于颈总动脉结扎那一侧的大脑半球，随着缺氧持续时间的不同，

出现选择性神经元死亡和堵塞，在大脑皮质、海马、纹状体及丘脑都能看见组织损伤，

皮质下及脑室周围白质的损伤也能被观察到［6］。这种模型已被证实在缺氧缺血性脑

损伤对运动能力、行为、癫痫发作、大脑成熟过程及其他机制的短期和长期影响的研

究上是非常有用的。最近，随着大脑缺氧缺血分子生物改变确实定，该模型已被用于

基因改变的未成年大鼠的特殊研究。

3.2局部短暂脑缺血及再灌注法

3.3宫内缺氧缺血法

多年以来，在新生儿HIE研究中最大的缺乏就是对宫内缺氧缺血所致脑损伤不能

进行准确真实的描述，而宫内缺氧缺血正是新生儿HIE重要病因之一。最近几年，国

内外医学工作者正在逐步弥补这种缺乏，应用最多的宫内缺氧缺血模型有两种：一种

是诱导孕羊患上低氧血症［12］；另一种是结扎孕羊脐带［13］，从而造成胎羊宫内

缺氧缺血性脑损伤。研究者应用这两种模型，获取了丰富的神经生理学相关资料，但

这两种模型仍然有很大缺陷：〔1〕孕羊体型大，价格昂贵；〔