Leica免疫组化染色的应用及标准操作规程.pptx

3免疫组化标准操作流程

4免疫组化的结果判读及结果分析

5全自动免疫组仪器的优势及解决方案

目录

1免疫组化的基本概念和科研应用

6小结

3

免疫组化的基本概念及应用

4

用标记抗体寻找组织细胞中抗原，来检测组织细胞中化学成分

用带标记的探针与目标序列互

补结合，检测组织中特定核算序列(RNA/DNA)

IHC及ISH的原理及用途

原位杂交ISH

6

杂交体

变性

杂交

已知DNA片段荧光素/生物素标记荧光素/生物素标记探针

特异性标记的抗体

（抗荧光素/抗生物素抗体）

显色原位杂交CISH

目的基因

显色

+

荧光显微镜

检测细胞、组织样

已知DNA片段荧光素标记荧光素标记探针

荧光原位杂交FISH

本中染色体或基因异常。

变性

杂交

暗场观察

目的基因

杂交体

+

+

9

免疫组化抗体的选择

10

抗体可与相应抗原特异性结合的免疫球蛋

白。

抗体的命名是和抗原的名字一样，比

如我们要检测的抗原是Ki67，那么相对应的抗体也叫Ki67抗体，简称Ki67.

二抗能与一抗相结合的抗体，将一抗的信

号进行放大，同时进行显色作用。

免疫组化专业术语

抗原组织细胞中表达的某种蛋白质，免疫组化检测目标。

11

针对多个抗原决定簇，

特异性差，

稳定性弱，

但阳性率高

免疫组化关键点解释——多克隆一抗

14

针对单一抗原决定簇，

特异性好，

稳定性强，

但阳性率低

免疫组化关键点解释——单克隆一抗

15

免疫组化标准操作流程

16

301医院

1234-876

HER2

301医院

1234-876

Ki67

301医院

1234-876

ER

免疫组化前处理

301医院

1234-876

PR

!

酸性

或

碱性

22

原因：甲醛固定导致抗原决定簇被封闭失活

目的：重新暴露抗原

方式：在弱酸性/弱碱性环境下加热，或酶修复

BOND抗原修复方式：

ER1酸性修复

ER2碱性修复

免疫组化关键点解释——抗原修复

假阴性

染色背景过重

修复不足

修复过度

抗原修复

23

l

l

u用吸水纸擦干载玻片，滴加一抗，注意不要碰触标本以防污染。

u对照实验时，可在对照的组织滴加PBS。

u滴加一抗后于4°C冰箱中保存过夜，或室温孵育50分钟。

免疫组织化学染色流程

一抗特异性结合目的抗原

25

u滴加一抗前，需使用PBS冲洗，3次，每5分钟一次

uPBS缓冲液冲洗的目的在于：

-使抗原抗体反应在合适的PH环境中进行。

-除去组织细胞中抗原抗体或抗体之间的非特异性结合。

梁英杰主编.临床病理学技术.人民卫生出版社.

免疫组织化学染色流程

PBS冲洗

免疫组织化学染色流程

一抗特异性结合目的抗原

二抗体系结合一抗

27

羊抗兔

能和抗体结合，即抗体的抗体。

作用检测一抗的存在，放大一抗的信号。

与一抗(鼠抗人)结合

兔抗人的一抗免去此步

免疫组化关键点解释

辣根过氧化物酶

催化无色DAB生成显色物质

一抗后抗体

紧密聚合物

二抗

兔抗鼠

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u滴加一抗前，需使用PBS冲洗，3次，每5分钟一次

uPBS缓冲液冲洗的目的在于：

-使抗原抗体反应在合适的PH环境中进行。

免疫组织化学染色流程

PBS冲洗

梁英杰主编.临床病理学技术.人民卫生出版社.

免疫组织化学染色流程

一抗特异性结合目的抗原

二抗体系结合一抗

DAB色原物质显色

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显微镜下监控显色过程，及时停止

显色，以防背景染色过深。

免疫组化关键点解释

梁英杰主编.临床病理学技术.人民卫生出版社.

显色

衬染的目的是形成细胞轮廓，从而更好地对目标蛋白进行定位

衬染后需流水冲洗

免疫组织化学染色流程

梁英杰主编.临床病理学技术.人民卫生出版社.

衬染

使用盐酸酒精分化可脱去组织过多

结合的染色剂，使细胞核过多结合苏木素染料和细胞浆吸附的苏木素染料脱去。

免疫组织化学染色流程

梁英杰主编.临床病理学技术.人民卫生出版社.

分化

分化后，立即用水除去组织切片上

的酸而终止分化，再用弱碱性水使苏木素染色的细胞核呈蓝色

免疫组织化学染色流程

梁英杰主编.临床病理学技术.人民卫生出版社.

流水蓝化

蓝化后，切片经梯度酒精脱水二甲

苯干燥（85%乙醇、95%乙醇、

无水乙醇、无水乙醇、二甲苯I、二甲苯II）。

免疫组织化学染色流程

梁英杰主编.临床病理学技术.人民卫生出版社.

脱水

DAB显色的沉淀物较稳定，不