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几种防腐挑战常用方法的异同

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防腐挑战方法对比

目的

介绍几种防腐挑战常用方法的异同

具体内容

目前，国际上有多种防腐挑战的测试方法可供参考，但其在所使用的微生物种类、培养条件、接种方式和评价标准不完全相同。下面比较了CTFA（美国化妆品、盥洗用品和香料协会）、USP法（美国药典）、EP(欧洲药典）、ISO11930、广东省日化商会团体标准5种方法的异同。

测试微生物

5种不同防腐挑战测试方法所用的测试微生物见表1。

表15种不同防腐挑战测试方法所用的测试微生物

CTFA法（美国化妆品、盥洗用品和香料协会）

USP法（美国药典）

EP(欧洲药典）

ISO11930

广东省日化商会团体标准

菌种

种类

菌株

备注

革兰氏阳性菌

金黄色葡萄球菌

至少选一种

金黄色葡萄球菌(ATCC6538)

金黄色葡萄球菌

金黄色葡萄球菌

金黄色葡萄球菌ATCC6538

表皮葡萄球菌

发酵革兰氏阴性杆菌

肺炎克雷伯氏菌

至少选两种

阴沟肠杆菌

大肠埃希氏菌

大肠杆菌(ATCC8739)

大肠杆菌

大肠杆菌

大肠杆菌ATCC8739

日沟维肠杆菌

变形菌属

非发酵革兰氏阴性杆菌

绿脓杆菌

至少选一种

铜绿假单胞菌(ATCC9027)

铜绿假单胞菌

铜绿假单胞菌

铜绿假单胞菌ATCC9027

洋葱假单胞菌

荧光假单胞菌

恶臭假单胞菌

黄杆菌属

不动杆菌属

酵母

白色假丝酵母

至少选一种

白色念珠菌(ATCC10231)

白色念珠菌

白色念珠菌

白色假丝酵母ATCC10231

近平滑假丝酵母

霉菌

黑曲霉

至少选一种

黑曲霉(ATCC16404)

巴西曲霉

巴西曲霉

巴西曲霉ATCC16404

黄绿青霉

从表1中可知，USP、EP、ISO11930、广东省日化商会团体标准中对于防腐挑战测试的微生物种属是相同的，只是在具体的菌种代码有所区别。CTFA在选取挑战用菌时的余地最大，每一类型的微生物至少需要选择一种，还可以根据实验需求选择性地添加枯草芽孢杆菌和环境中分离的微生物作为测试微生物。欧洲药典也可以选择性地增加可能污染产品的其他微生物进行测试。

菌种的传代次数

为防止菌种因传代次数过多后转化为敏感性菌株，各方法对菌种的传代次数均有限定，USP、广东省日化商会团体标准规定不超过5代，ISO11930则不超过3代，EP是代数越少越好。

接种量

各方法的微生物接种量均≤1%

菌液终浓度

CTFA、广东省日化商会团体标准中规定细菌菌液在样品中的最终浓度为106CFU/g(mL)，真菌菌液的最终浓度为105CFU/g(mL)，USP、EP中细菌和真菌的菌液终浓度均为105-106CFU/g(mL)，ISO11930则规定细菌菌液的终浓度为105-106CFU/g(mL)，真菌菌液的终浓度为104-105CFU/g(mL)。

取样时间

不同方法的取样时间间隔不一样，其中CTFA的取样间隔最密，为0、7、14、21、28天；欧洲药典没有规定具体的取样时间点；USP为0、7、14、28天；ISO11930为7、14、28天；广东省日化商会团体标准则为7、14、21、28天。

评价标准

5种不同防腐挑战测试方法的评价标准如表2所示。

表25种不同防腐挑战测试方法所用的测试微生物

注:NI代表不增长，与之前的测定结果相比不超过0.5个对数单位;NR代表不恢复生长；USP：A代表注射剂、乳状注射剂、耳用制剂、灭菌鼻用制剂和眼用制剂等水基制剂；B代表用于粘膜的水基制剂，如未灭菌鼻用制剂；C代表除抗酸剂之外的水基口腔制剂；D代表水基抗酸剂；EP：A代表注射剂、眼用制剂、用于子宫和乳腺的制剂；B代表耳用制剂、鼻用制剂、皮肤给药制剂、吸入制剂；C代表口服制剂、口腔黏膜制剂、直肠给药制剂;其中1代表应达到的标准；2代表在特殊情况下，过多的防腐剂会增加不良反应的风险，则产品必须达到2的标准；ISO11930：A代表在不考虑其他任何因素的前提下，此标准可以保护配方因微生物繁殖而对使用者造成危害；B代表如果风险分析表明存在与配方不相关的控制因素，则说明化妆品的微生物风险是可接受的，保护水平也是可以接受的。